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科研学霸天团,48小时有问必答
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我想知道免疫组化和ELisa 都可以测的一个指标,优先考虑哪个方法呢?
bamboopiggy
最好两种方法都做,互相验证,使结果更solid
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问
请问悬浮细胞如何做免疫荧光,如何把细胞固定在在载玻片上
未来9
细胞离心,PBS洗3遍,去除血清的影响,洗好后离心,吸弃上清,最后离心管内总共剩含细胞液体500ul左右,打匀,用转移适量至PLL处理好的载玻片上(悬浮细胞最好处理一下),用头平着推开液滴,铺平。自然风干,可以用手来回晃动,加快蒸发,建议时间稍长,15~20min左右。具体还要自己摸索一下,根据自己细胞情况,数量等调整液体量及时间。制备悬浮细胞方法同上,调整细胞数在10的6-7次方左右。PL
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问
通过免疫组化或免疫细胞化学的方法检测组织或细胞中的Bcl-2,底物颜色没有变红是因为什么?
bamboopiggy
要么你反应过程中有步骤做错了,要么是bcl2在你组织中表达量低
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问
请教各位大神,这个图要如何解读?尤其是左上的DAPI染色?
bamboopiggy
每个图上标的蛋白的颜色,和图中染的颜色是一致的,感觉你这俩蛋白在胞浆,没有和dapi重叠,但是你这俩蛋白可以共定位
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问
动物流式实验怎么设门?
异乡人hyq
一般根据散射光进行设门,即我们通常所说的前散(forward scatter, FSC)和侧散(side scatter, SSC)来设门。FSC的大小与细胞的直径成正相关,不同的细胞,细胞越大,其FSC越大;反之越小。SSC的大小与细胞内颗粒结构的质量成正相关,不同的细胞,细胞内颗粒结构越复杂,质量越大,其SSC越大;反之越小。
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问
分别收集EGF刺激0分钟、5、10、30分钟的1841乳腺癌细胞,提取蛋白质,分别进行酶解,然后采用iTEAQ中的不同核素标记。
天一湖医者
采用iTRAQ试剂中的114Da、115Da、116Da和117Da不同同位素标记。将它们等量混合,采用抗泛酪氨酸磷酸化抗体进行免疫沉淀,再经过固相金属亲和层析(Im¬mobilizedmetalaffinitychromatography,IMAC)进一步纯化,最后用LC-MS/MS。
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问
小鼠肺组织在20%蔗糖里浸泡了三四天都没下沉是怎么回事
bamboopiggy
你用蔗糖是要对肺组织脱水的,一般我们会在肺组织上戳个牙签,让肺组织沉下去
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问
做WB,跑胶的时候,有黄色的拖尾,有一个孔甚至都直接变成黄色的了,想请教一下是胶的问题还是别的什么原因
cxsm
可能是loading buffer的PH吧
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问
做MTT实验时,铺板时间太长,会对细胞有影响吗?多久时间会对细胞有影响?
cxsm
这很难说,要尽量保证细胞的生长空间和营养物质的提供
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问
如何测量DNA纳米花的浓度
bamboopiggy
通过变性凝胶电泳纯化,用紫外线吸收光谱来定量测定
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问
免疫组化实验过程中,切片背景过深是怎么回事?
bamboopiggy
降低抗体浓度,主要是二抗的浓度,在二抗孵育显色过程中,时不时的拿到镜下看看,如果觉得可以了,就停止孵育
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问
免疫组化实验中,如果所有的切片呈阴性,我们该怎么办?怎么确定不是假阴性?
Mani-F
仔细检查实验记录,确定所有步骤没出错,再用阳性对照确定抗体有没有问题,都没问题,那有可能切片就是阴性的。
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问
一抗是兔来源的抗体,二抗可以用抗山羊的二抗来匹配吗?
Mani-F
不可以用抗山羊的二抗,二抗必须用抗兔的!
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问
免疫组化实验过程中,对照组无染色,怎么排查原因啊?
bamboopiggy
对照组找确定的阳参,如果阳参无染色,证明实验过程有问题,首先看抗体的种属是否合适,如果合适,再看试剂是否有问题。
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问
各位大神,细胞因子检测的ELISpot实验数据如何处理呢?为什么我看其他实验室的小伙伴们都乘以1.25呢,这个系数是如何定的呢?
天一湖医者
ELISpot实验数据结果采取为斑点计数(可人工计数,也可用自动读板仪计数)
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问
想请问检测细胞凋亡率除了流式还有什么方法吗?
bamboopiggy
检测凋亡的方法有好多,但是建议还是流式检测,因为最方便。其他的方法包括:Caspase-3活性检测Caspase(cysteinyl-aspartic acid proteases)蛋白家族的活化是细胞凋亡的特征,在介导细胞凋亡过程中具有重要的作用。其中Caspase-3作为关键的执行分子在细胞凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常细胞中以酶原形式存在,在凋亡早期被的活化,但在凋
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问
干细胞纯度用流式细胞仪怎么看
bamboopiggy
如果cd90和cd105双阳的。就是在右上象限,然后有个百分比的读值可以直接看出来
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问
请问小鼠带早起胚胎的子宫切片哪里可以购买到?
dxy_e21m06hw
我有,不过是自己做出来的,结果也很好,你需要吗
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问
请问小鼠带早起胚胎的子宫切片如何制作?
府宅
1.1取材成年雌性昆明小鼠,体重约30 g ,于傍晚与成熟雄性小鼠2:1合笼,次晨查见阴栓者定为孕第1天。于孕第6天下午3~4时颈椎脱白处死,剖腹取出双侧子宫角。呈结节状膨大处为胚胎植入部位。剪除子官系膜,但在近子宫处保留少许。用 PBS 冲洗两次,充分拉直后铺展在滤纸上,常规固定、冲洗。1.2包埋将固定好的组织依次放入70%、80%、90%、95%(2次)、100%(2次)酒精中脱水,各30mi
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问
如何提高抗体染色的特异性呢?延长封闭时间和二抗时间可行吗?
大草原的小灰驴
1.提高一抗的稀释倍数,降低第一抗体的浓度2.把多克隆抗体换成单克隆抗体3.缩短孵育的时间4.延长封闭的时间
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