免疫组化实验中，如果所有的切片呈阴性，我们该怎么办？怎么确定不是假阴性？

相关实验：SPA 在免疫组化中的应用

wuyou3473

2022-04-26

4 个回答

Mani-F

2022-04-26

有帮助

仔细检查实验记录，确定所有步骤没出错，再用阳性对照确定抗体有没有问题，都没问题，那有可能切片就是阴性的。

bamboopiggy

2022-04-26

有帮助

如果连阳参都是阴性的，首先怀疑抗体有问题，或是试剂的浓度有问题，

天一湖医者

2022-04-26

有帮助

1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液，怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果?另外，不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果，抗原抗体反应有前带和后带效应，必须摸索zui佳浓度。

2、抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合;建议微波修复用高火4次6min试试。有人做过实验，这是zui佳的时间和次数。若不行，还可高压修复。

3、组织切片本身这种抗原含量低;

4、血清封闭时间过长。

5、DAB孵育时间过短。

6、细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。

7、开始做免疫组化，我建议你一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等外的方法问题。

未来9

2022-04-26

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所有切片呈阴性原因分析： a.缓冲液内含叠dan化钠，抑制酶的活性； b.染色未完全按照操作步骤进行； c.漏加一种抗体或抗体失活； d.复染或脱水剂使用不当； e.底物中加入的过氧化氢少或失活。解决措施：设立“阳性对照”。如果阳性对照有了表达，说明染色的全过程和所有试剂都没有问题。如果此时测试片仍为阴性，便是真实的阴性，说明组织或细胞没有相应的抗原表达。

假阴性问题：设立“阳性对照”。如果阳性对照有了表达，说明染色的全过程和所有试剂都没有问题。如果此时测试片仍为阴性，便是真实的阴性，说明组织或细胞没有相应的抗原表达。反之，如果阳性对照没有着色，表明染色过程中某个或某些步骤出了问题或试剂出了问题。