SPA 在免疫组化中的应用

实验分类：

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

SPA 可为多种示踪物（如荧光素、酶、胶体金、铁蛋白）所标记，应用较广泛的为酶标记 SPA 和金标记 SPA 技术。标记 SPA 常用的酶为 HRP，可应用于间接法染色，SPA 在 PAP 法中可代替桥抗体。

内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》

来源：丁香实验

操作方法

间接法

1. 石蜡切片常规脱蜡至水。2. 3％ H2O2 处理 15 min，以抑制内源性过氧化物酶。3. TBS 洗 3×3 min。4. 加第一抗体，孵育 30～60 min，或 4℃ 过夜。5. TBS 洗 3×3 min。6. 加适当的稀释的 SPA-HRP（1:100～1:400），孵育 30～60 min。7. TBS 洗 3×3 min。8. DAB 显色 5～10 min。9. 复染、脱水

PAP 法

1. 4 μm 石蜡切片常规脱蜡至水，PBS 洗 3×3 min。2. IHC 的前处理视特异性一抗不同，可采用蛋白酶消化或热诱导的微波抗原修复（AR）。3. PBS 洗 3×3 min。4. 3％过氧化氢（H2O2）孵育 10 min（可省略），以阻断内源性过氧化物酶活性。5. PBS 洗 3×3 min。6. 20％蛋清 [用 0.01 mol/L（pH 7.3）PBS 配制] 孵育 20