间接法

由于 SPA 能结合 IgG 的 Fc 段，因此就成为天然的抗 IgG，酶标记的 SPA 可代替酶标记的 IgG 抗血清，从而测定和定位组织内的 IgG 或免疫复合物。

1. 石蜡切片常规脱蜡至水。

2. 3％ H₂O₂ 处理 15 min，以抑制内源性过氧化物酶。

3. TBS 洗 3×3 min。

4. 加第一抗体，孵育 30～60 min，或 4℃ 过夜。

5. TBS 洗 3×3 min。

6. 加适当的稀释的 SPA-HRP（1:100～1:400），孵育 30～60 min。

7. TBS 洗 3×3 min。

8. DAB 显色 5～10 min。

9. 复染、脱水、封片。