免疫组化实验过程中，切片背景过深是怎么回事？

降低抗体浓度，主要是二抗的浓度，在二抗孵育显色过程中，时不时的拿到镜下看看，如果觉得可以了，就停止孵育

以下几方面会导致切片的背景过深:1. 蛋白质封闭不够或所用血清溶血,造成抗体的非特异性反应;2. 内源性过氧化酶没有完全阻断,显色过程中过氧化酶与酶底物反应,造成背景;3.底物呈色反应时间过长或呈色反应后漂洗不彻底。

1）抗体浓度过高

2）抗体孵育时间过长或温度较高

3）DAB变质和显色时间太长

4）组织变 干

5）切片在缓冲液或修复液 中浸泡时间太长（大于24小时）

6）一抗变质、质量差的多克隆抗体