实验问答4,424,395 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问请问这几个蛋白质pull down结果该怎么看呢？

bamboopiggy

pull down的wb结果，其中input指的是whole lysate的上样，然后用s-protein 做pull down，图B说明ASAP和ATP5A可以相互作用。C说命ASAP和ATP5C可以相互作用。然后用asap做IP，可以拉下atp5a和atp5c来。都是为了说明他们能相互作用SFB指的是SFB标签=S-tag, Flag-tag, and SBP-tag 融合到一起MBP指的的

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问求含有8M盐酸胍的样品如何跑SDS-Page

bamboopiggy

需要通过把样品从8M盐酸胍中复性，然后纯化，然后再跑SDS-Page

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问请问这个pull down结果图怎么看

bamboopiggy

没看到图，全靠猜了，应该是在293T中过表达了ASAP以及ATP5A、5C，然后用抗体互相拉，证明他们之间有相互结合。至于里面写total input的，是全细胞裂解液，293T细胞中，这几个基因过表达成功。至于用293T细胞，是因为293是一个各种蛋白表达量都比较高的工具细胞。

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问请问胶的边缘为什么会弯，下次如何避免

未来9

会不会是有点漏胶玻璃板要洗干净，注意固定好玻璃板

3 回答76 围观

问请问老师跑成这样什么原因呀？

whilt-shirt

胶有问题或者电泳液过期了，建议重新配胶电泳

3 回答84 围观

问这个免疫共沉淀的图怎么看，我知道结果，我想知道怎么分析的。谢谢各位了

bamboopiggy

简单说一下，上面两个band是IP样品的结果，下面的是total input，也就是whole cell lysis 跑的。total input 可以看到his和flag的那俩蛋白只要加进去就有表达。然后看ip的，用his去拉的，如果加入了lrp5-flag 就可以拉下来，说明两个有相互作用，在有TGF-β1的情况下，TβRI-his表达增加，但是加入lrp5-flag后，TβRI-his的表

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问免疫共沉淀标签的作用？

bamboopiggy

有标签，用标签抗体，比特异性抗体便宜且好用

3 回答99 围观

问ip实验IgG组也有条带什么原因

dxywode

你的样品是否煮样？ IgG的轻链大小25KD，重链大小为50KD，所以很有可能是重链。建议IP抗体和WB抗体使用不同种属来源的一抗。

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问麻烦各位老师帮忙看一下，这个36Kid出来是这样的，什么原因？转膜时候时间到的时候中间拿出来时候膜上没有印到蛋白，出来就是这样

bamboopiggy

可能是你转膜的三明治夹心没有做好，膜和胶没有接触好。

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问在提取RNA或者蛋白质粉时候，用匀浆机进行匀浆更好还是超声更好？

未来9

感觉没有太大差别！超声做起来简单方便，不用清洗匀浆器

3 回答155 围观

问WB时，染糖基化，感觉条带整体上移，另一张膜actin位置正常，这是怎么回事？？

迟C迟

目的蛋白存在翻译后修饰，需要查询数据库及文献资料，了解目的蛋白是否存在翻译后修饰，例如磷酸化、糖基化、泛素化修饰等，这些均可能影响条带的位置。翻译后剪切：许多蛋白首先是以前体形式合成，之后通过剪切形成活性形式，大小也随之改变。例如 Human IL-1β 前体蛋白（precursor），经过 CASP1 酶剪切后，形成 Human IL-1β 蛋白。目的蛋白可能存在多种异构体（Isoform），同

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问WB 内参问题为什么两条带？

bamboopiggy

1.GAPDH抗体的特异性不好，出现杂带2，running buffer是否弄错了。3，转膜时，是否胶变性了。

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问请问各位大佬，本人构建了x-pET28a的质粒，转到了C43感受态里，在37℃摇起来了，结果加完诱导剂28℃越摇越澄清什么情况？

天一湖医者

.1工程菌的问题，可能携带的质粒已经丢失，工程菌不具有抗性，建议在诱导前先检测一下质粒稳定性.2.活化诱导时加入的抗生素过低未加或失效，扩大培养时加入抗生素又过量，建议重新配制抗生素.3.加入的IPTG浓度过高.4.培养基的问题，营养不足.

3 回答220 围观

问要做乳酸菌膜蛋白差异分析，可是用了贝博的膜蛋白提取试剂盒感觉效果不好，问一下提膜蛋白的师兄师姐们，有没有好的提取膜蛋白的方法，谢

bamboopiggy

根据你的实验目的，你选一个要用的试剂盒吧，虽然我不能提公司的名字（要不就说我打广告），但是你应该可以搜到。对于这些比较细的实验，建议不要买国产的试剂盒，虽然便宜，但是做不出好结果。

2 回答192 围观

问糖蛋白都有哪些呀？有没有纯糖蛋白

bamboopiggy

糖蛋白是一种含有寡糖链的蛋白质，两者之间以共价键相连。其中的寡糖链通常是经由共转译修饰或是后转译修饰过程中的糖基化作用而连结在蛋白质上。糖蛋白多肽链常携带许多短的杂糖链。它们通常包括N-乙酰己糠胺和己糖（常是半乳糖或甘露糖，而葡萄糖较少）。我感觉你可能没有理解你导师的一声，最好去和你导师double check一下，你导师可能想让你表达一个蛋白，但是有糖基化修饰

3 回答102 围观

问请问这是什么原因造成的呀，好多杂带

天一湖医者

1）目的蛋白有多个修饰位点，本身可以呈现多条带，建议查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小2) 样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作3）杂蛋白多，建议处理目的蛋白4）抗体特异性不强，建议使用特异性强的抗体5）抗体孵育时间过久，建议减少抗体孵育时间6）二抗与抗原有交叉反应，建议选择合适的封闭物7）二聚体或多聚体存在，

3 回答111 围观

问wb实验制胶为什么老有气泡呢？如图气泡感觉是在胶和玻璃板之间（板子认真洗干净并且烘干了，图片脏是板子后边的架子）请各位帮帮忙。

bamboopiggy

如果确定玻璃板洗干净了，那就是玻璃板不平，你别用这块了，换一块。

3 回答155 围观

问蛋白跑成这样咋办，断断续续的，该怎么解决

bamboopiggy

不是跑胶的问题，是你转膜的三明治夹心没有弄好，有的地方转的不匀

3 回答116 围观

问WB电泳条带弥散不清

bamboopiggy

这个明显是你蛋白浓度高了，你减少一下上样量，20-25ug就够了，不用上太多。太多了，到下面，就压不平了

3 回答534 围观

问细胞活性氧试剂盒荧光检测

迟C迟

看你的实验步骤没什么问题，应该就是细胞活性氧试剂盒检测的问题，建议换试剂盒。

3 回答441 围观

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