求助，WB没有条带背景一片黑

你确定你所有的步骤都和师姐一样？尤其是封闭液以及封闭时间，还有就是洗膜时间，洗膜用的液体？感觉你这个是抗体不好，非特异性结合，你用的抗体也是和师姐一样么？

背景黑可能有以下几个原因:
1.没有封闭好,但这个可能很小
2.一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例,你最好先做个titration,确定一个最佳的抗体稀释比例
3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长

如果是同一个抗体别人做出来了，你做不出来，那就是实验过程的问题，提蛋白的步骤有没有问题，蛋白浓度会不会太低了，转膜有没有问题，一个一个排除