WB曝光时间很短，结果无条带，背景黑是什么原因？（换了不同的封闭条件、一抗浓度均无效，麻了）

是所有条带都黑，还是只有你的目的条带？如果只有目的条带，先确定你的抗体是好用的

提高蛋白上样量，换超敏发光液，还不行的话就是抗体问题，找试剂商换抗体

1. 没转上去
2. 剪膜剪掉了
3. 蛋白不表达
4. 没封闭好

背景黑可能有以下几个原因:
1.没有封闭好,但这个可能很小
2.一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例,你最好先做个titration,确定一个最佳的抗体稀释比例
3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长