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科研学霸天团，48小时有问必答

问慢病毒求助

bamboopiggy

用小鼠的转录本，然后找其中最长的一个就可以。

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问细胞提蛋白

毛利小五郎的徒弟

你可以试一试，思路和方案可行。

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问f图里面的入-phosphatase是磷酸激酶吧，那它在这里的作用是什么呢

毛利小五郎的徒弟

这个起催化作用，引起促酶链式反应。

3 回答55 围观

问文献看到的图像问一下这个图怎么看，Vcetor代表啥

juyue2010

+号代表含有这个东西，vector是空载体

4 回答134 围观

问为什么电泳时内槽电泳液有拉丝，并且内槽电泳液变成乳白色？

毛利小五郎的徒弟

可能是你的电泳槽被硫酸根离子污染

3 回答171 围观

问怎么使用Quantity One进行wb条带的灰度分析，特别是怎么去除本底

毛利小五郎的徒弟

Quantity One可以直接进行灰度值的计算，去除本底在开始时可以简化。

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问我做wb的时候为什么目的条带有两条啊？

毛利小五郎的徒弟

可能是非特异性条带，蛋白纯化不足，胶不合适等原因

4 回答67 围观

问GST pull - down assay和免疫共沉淀的区别是什么?

genecreate

GST pull-down一般指用一个带GST标签的重组蛋白，与目的蛋白进行孵育，最后用结合GST的Beads拉下相互作用复合物。免疫共沉淀一般是用某一蛋白的抗体，在细胞裂解液中与相应的蛋白结果，用Protein A/G将抗原抗体复合物拉下，最后在拉下的复合物中检测目的蛋白的实验。二者都是用于检测蛋白相互作用的实验。区别是pull-down一般是验证体外相互作用；免疫共沉淀一般用于检测细胞水平

3 回答257 围观

问免疫沉淀实验能用组织样品做吗？

genecreate

可以的免疫沉淀实验当然可以用组织样品做

4 回答64 围观

问为什么WB的结果是这个样子？是哪一步出了问题

balalaLy

转膜的时候有气泡，以及抗体孵育不均匀。

3 回答49 围观

问16KD小分子蛋白的WB实验，一直未跑出来，求大神们指点指点。

毛利小五郎的徒弟

胶配的不好，校正一下胶的比例后再来

3 回答171 围观

问细胞WB抗体怎么选

Marchers

一抗选羊抗，兔抗或者是人源性抗体都可以，得结合文献来确定最后用哪种特异性好，另外单克隆优先

3 回答178 围观

问关于脑蛋白western blot

毛利小五郎的徒弟

蛋白纯化不够，上样感觉上的多了。

3 回答92 围观

问膜蛋白内参选什么

balalaLy

有一种说法是actin不在膜上面表达，而GAPDH有表达，所以GAPDH会适合一点

4 回答1016 围观

问Western blot的胶

毛利小五郎的徒弟

最好还是不要用过期的胶，效果不好

3 回答83 围观

问求助关于p-s6蛋白跑WB的问题

bamboopiggy

S6 是mTOR下游的p70S6K的底物，你可以检查一下p70S6k有没有改变，有的时候，pS6对pAKT会有负反馈抑制，所以可能akt的改变不明显，而p-mTOR有不同的磷酸化位点，你查的那个可能正好没有变化，或者是因为mTOR有点大，你wb不好跑

2 回答67 围观

问请问RAW细胞表达CD86吗

毛利小五郎的徒弟

RAW 264.7是可以表达CD86的

1 回答334 围观

问想问一下为什么检测未知蛋白的时候要加标签呀？直接用需要检测蛋白的抗体孵不可以嘛？

balalaLy

看是什么标签，像GFP这类荧光标签就是为了方便观察

3 回答51 围观

问想问问电泳80V，30分钟跑出浓缩胶，分离胶调低电压60V，90分钟跑分离胶，这样蛋白会弥散吗？

balalaLy

蛋白没那么容易弥散，停掉电泳放一个小时也还好，有持续的电流拉着蛋白跑就更不会弥散

3 回答35 围观

问ELISA实验抗体的选择

毛利小五郎的徒弟

单克隆或多克隆抗体都可以用作夹心ELISA系统中的捕获和检测抗体

4 回答233 围观

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