WB实验，新手小白第一次做，60KD蛋白最后显影没有条带，想问一下湿转转膜条件

60kDa的蛋白Western转膜液不需要添加SDS,SDS是促进蛋白从胶里面脱离出来，大分子蛋白可以尝试添加。转膜时间有点短了。可以观察一下胶上面还有没有残留的marker。如果有就是没有完全转过去。

1，这应该没转过。

2.转膜时只设置了电压80V，没有设置电流，这不会有影响

3.不用设置电流

4.一抗用一抗稀释液稀释的1：800，看抗体牌子，好点的抗体不算稀

5.这个没试过不知道

一抗浓度1:800太低了，建议提高一抗浓度

可以给你一些建议：

1. 转膜条件：80V电压和90分钟的转膜时间通常可以用于湿式转膜。浅浅的marker条带显示在滤纸上可能表示已经成功转膜了。你可以尝试使用染色剂如Ponceau S来验证蛋白质是否转移成功。

2. 电流设置：通常情况下，设置电压而没有设置电流是可以的，因为电流是由电压和电阻决定的。只设置电压可以让电流自动调整到适当的范围。因此，你目前的电流情况应该是正常的。

3. 电泳条件：80V电压持续30分钟，然后120V电压持续90分钟是常见的电泳条件。电压和时间的设置通常会根据蛋白质大小和电泳装置的要求进行调整。你当前的设置在理论上应该可以完成电泳。

4. 一抗浓度：一抗的稀释液浓度会根据抗体的特性和效价来确定。1：800的稀释液浓度可以适用于某些抗体，但对于其他抗体来说可能太稀释了。你可以尝试调整一抗的稀释液浓度，通常可以在1：500至1：2000范围内尝试不同的稀释比例。

5. SDS在Western转膜液中的加入通常是为了破坏细胞膜和解离蛋白质复合物。0.037g SDS的加入量可能会过多，导致影响转移效果。建议根据Western转膜液的配方，参考提供的浓度范围和说明书，精确称量和配制Western转膜液，确保加入的化学物质符合指定的配方。