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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
关于WB蛋白质提取,如果是悬浮细胞或者说细胞死亡过多怎么提取(可以的话发下实验方案)?谢谢!
周末也要努力呀
悬浮细胞离心后直接加裂解液就行了,最好超声一下增加浓度
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问
趋化因子CCL20和CTSD/CTSB怎么共同孵育,怎么继续做Western实验
龙大人驾到
想要在硬骨鱼中重复一篇文献中的实验,这篇文献中的实验主要是研究组织蛋白酶B和D对趋化因子CCL20的切割作用。下面是一些可能有用的步骤:共同孵育:共同孵育是将两种蛋白质一起孵育的实验步骤,目的是研究它们之间的相互作用。在共同孵育前,需要确定孵育的最佳条件,如温度、时间和缓冲液等。对于硬骨鱼中的组织蛋白酶和CCL20,可以先尝试在不同的缓冲液中进行共同孵育,例如PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液等
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问
wb中,一抗敷完,可以泡在tbst里面第二天再敷二抗吗?
dxy_5p1hk3yq
不可以,效果会不好,泡Tbst时间长了会影响显色效果,问就是试过这样,出来很淡
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问
构建pre-miRNA过表达载体问题
高山云初
萤火虫荧光素酶基因和海肾荧光素酶基因,基因用LUC和pmirG没有什么区别。
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问
如何将GST标签添加至蛋白的C末端?
huarenqiang5
一般利用重组DNA技术插入到目的蛋白的C末端。
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问
为什么跑完蛋白总是靠近浓缩胶这一半胶脱不了色
huarenqiang5
考虑胶的浓度过高,建议降低浓度。
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问
组织蛋白酶酶切趋化因子实验步骤怎么做啊??大家
周末也要努力呀
组织蛋白酶酶切趋化因子实验一般分为以下几个步骤:1. 提取趋化因子:从细胞培养上清液或组织中提取趋化因子。2. 纯化趋化因子:通过某些分离纯化技术,如离子交换层析、凝胶过滤层析等,将趋化因子纯化。3. 制备底物:制备含有趋化因子底物的凝胶,如聚丙烯酰胺凝胶。4. 酶切实验:将纯化的组织蛋白酶加入含有趋化因子的凝胶中,进行酶切反应。反应后,观察凝胶中的趋化因子是否被酶切分解,从而判断组织蛋白酶对趋化
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问
为啥我的co-ip阴性对照有条带呢?
龙大人驾到
如果在共免疫沉淀(Co-IP)的阴性对照组中观察到条带,可能存在非特异性结合的情况。这种非特异性结合可能是由于实验条件、试剂或样品中其他成分引起的。以下是一些处理非特异性结合的常见方法:1. 优化实验条件:确保使用正确的缓冲液、温度和pH值等实验条件。适当的优化可以减少非特异性结合。2. 阻断剂:添加合适的阻断剂可以降低非特异性结合。常用的阻断剂包括非特异性蛋白质(如牛血清蛋白、鱼胶等)或非特异性
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问
Elisa实验做完,吸光度太高,一般是什么原因呢?
dxy_xextz7w2
有可能是试剂和样品没有混合均匀
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问
岛津的nsmol试剂盒对单抗进行酶解并富集后,可以直接进质谱吗?
毛利小五郎的徒弟
可以直接进质谱的,这个试剂盒效果不错
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问
组织切片免疫荧光的表达量是看亮度还是看染色密度的?
huarenqiang5
组织切片免疫荧光的表达量一般情况下是看亮度,而不是看染色密度。
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问
两个组别的同一目的条带在wb中位置不同(内参齐平)
科研小dog
两个组别,是细胞不同还是组织来源不一样呢?相同蛋白在不同类型细胞和组织,受到不同修饰或者是其他原因的影响,有可能分子大小是会不一样的,这就会导致目的条带不在同一个位置上。
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问
为什么全菌的蛋白条带总是糊成一片,不是清晰的条带?而且诱导的蛋白和纯化蛋白条带不一致是怎么回事,一个是纯化蛋白,一个是诱导后全菌
huarenqiang5
主要考虑可能是上样量过多或样品弥散导致。
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问
鉴定到的蛋白与凝胶电泳图谱中估测分子量差异很大的原因?或者为什么SDS-PAGE胶上不同位条带的质谱鉴定结果中含有同一个蛋白?
huarenqiang5
由于体内或者体外因素,导致同一蛋白存在不同形式的修饰、剪切或者降解,从而形成凝胶电泳图中能够看到的存在差异分子量的蛋白条带。然而这些蛋白在质谱鉴定时会同时指向数据库中同一个、全长的、无修饰的蛋白理论序列。因此会出现凝胶电泳图中的蛋白分子量(实际分子量)与鉴定的蛋白分子量(理论分子量)不同的情况。
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问
蛋白质胶总是凝的很慢,凝的不好怎么回事
高山云初
过硫酸铵一定要现用现配,时间久了就会造成不凝.这是最常见的不凝的原因
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问
如果skyline锁定的所有离子对均不出峰,该怎么锁定目标离子对?
高山云初
在碰到样品没有出峰的情况,首先考虑是否是因进样浓度太小,运行时间不够,仪器和色谱柱故障,样品是否降解变质,检测器(检测波长)的选择是否准确等问题导致的。如果排除上述问题,样品仍未出峰,则很有可能是样品在固定相上保留太强,这样可以先调整流动相的洗脱能力,增强对化合物的洗脱,或者更换更合适的固定相,如反相C18换成碳载量低一些的C18或者短碳链的反相柱如C8等。
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问
ELISA实验和液质联用法(LC-MS)相比,有何优缺点?
高山云初
缺点:1、重复性不好;2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰,易出现假阳性;3、不论仪器和手工操作,干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。
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问
高效液相色谱用于分离酶解后的蛋白,还需要纯化吗?
sswei
高效液相色谱用于分离酶解后的蛋白,还需要纯化
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问
请问对于新上市的多肽类药物,如何在skyline软件上寻找可能性较大的离子对?如何筛选出较少的目标离子对,用质谱MRM通道监测?
dxy_mqg1dtg8
对于新上市的多肽类药物,建议首先进行文献调研,了解该药物的化学结构、氨基酸序列和药代动力学等信息。根据该信息,可以使用Skyline软件构建出该药物的离子对库,包括预测的前体离子和碎片离子。在构建离子对库时,可以考虑以下几个方面:1. 根据氨基酸序列预测可能的碎片离子,包括b离子、y离子、a离子、x离子等。2. 针对药物的特殊结构,预测相关的碎片离子,如磷酸化、甲基化、乙酰化等修饰的碎片离子。3.
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问
大小分子蛋白各自的电泳胶浓度如何选择? 蛋白marker大分子条带降解原因? 蛋白样本跑胶时出现笑脸条带什么原因?
高山云初
微笑是因为你灌胶的时候冷却不均匀,中间部分冷却不好,导致凝胶中的分子有不同的迁移率所致
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