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由于体内或者体外因素,导致同一蛋白存在不同形式的修饰、剪切或者降解,从而形成凝胶电泳图中能够看到的存在差异分子量的蛋白条带。然而这些蛋白在质谱鉴定时会同时指向数据库中同一个、全长的、无修饰的蛋白理论序列。因此会出现凝胶电泳图中的蛋白分子量(实际分子量)与鉴定的蛋白分子量(理论分子量)不同的情况。
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由于体内或者体外因素,导致同一蛋白存在不同形式的修饰、剪切或者降解,从而形成凝胶电泳图中能够看到的存在差异分子量的蛋白条带。然而这些蛋白在质谱鉴定时会同时指向数据库中同一个、全长的、无修饰的蛋白理论序列。因此会出现凝胶电泳图中的蛋白分子量(实际分子量)与鉴定的蛋白分子量(理论分子量)不同的情况。
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SDS-PAGE是一种通过蛋白质的分子量来分离蛋白质的方法,但是分子量的估测并不是绝对准确的,可能存在误差。另外,当蛋白质处于非还原状态或者存在多聚体时,其分子量估测也可能出现误差。
质谱鉴定则是通过蛋白质的肽段序列来确定蛋白质的身份,因此可以鉴定出分子量相似或相同的蛋白质。在SDS-PAGE胶上不同位条带的质谱鉴定结果中含有同一个蛋白的原因可能是因为该蛋白存在多个异构体、修饰形式或者产生了剪切变异。
此外,SDS-PAGE和质谱鉴定是两种不同的方法,存在一定的互补性和局限性。SDS-PAGE只能分离蛋白质,却不能确定其具体的身份;质谱鉴定则可以确定蛋白质的身份,但是需要先将蛋白质分离成肽段。因此,结合两种方法可以更全面地鉴定蛋白质。
高山云初
两种方法原理不同,有差异是正常的,一般凝胶层析是非变性的,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是变性的,二硫键也被还原,所以是亚基(肽链)分子量。
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