两个组别的同一目的条带在wb中位置不同（内参齐平）

两个组别，是细胞不同还是组织来源不一样呢？相同蛋白在不同类型细胞和组织，受到不同修饰或者是其他原因的影响，有可能分子大小是会不一样的，这就会导致目的条带不在同一个位置上。

蛋白量不一样，最好使用loading补齐体积

1）二抗的非特异性结合

增加一个对照：不加一抗，其他操作过程不变，即可验证背景是否由二抗系统来源。选择其他二抗（特异性更强的，只针对重链的）。

（2）一抗的特异性不够

使用单克隆或者亲和纯化的抗体，保证抗体的特异性。

（3）蛋白降解

使用新鲜制备的标本，并使用蛋白酶抑制剂。

（4）二聚体或多聚体存在

增加蛋白质变性过程及强度。

（5）抗体浓度过高

降低抗体（一抗、二抗）浓度，可以减少非特异性条带。

（6）蛋白上样量过大降低上样量。