科研小dog
两个组别,是细胞不同还是组织来源不一样呢?相同蛋白在不同类型细胞和组织,受到不同修饰或者是其他原因的影响,有可能分子大小是会不一样的,这就会导致目的条带不在同一个位置上。
周末也要努力呀
蛋白量不一样,最好使用loading补齐体积
高山云初
1)二抗的非特异性结合
增加一个对照:不加一抗,其他操作过程不变,即可验证背景是否由二抗系统来源。选择其他二抗(特异性更强的,只针对重链的)。
(2)一抗的特异性不够
使用单克隆或者亲和纯化的抗体,保证抗体的特异性。
(3)蛋白降解
使用新鲜制备的标本,并使用蛋白酶抑制剂。
(4)二聚体或多聚体存在
增加蛋白质变性过程及强度。
(5)抗体浓度过高
降低抗体(一抗、二抗)浓度,可以减少非特异性条带。
(6)蛋白上样量过大降低上样量。
相关产品推荐