实验问答4,313,097 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问公司定的pcr引物如何验证是否合适？

丁香清香

可以用于正式实验的引物必须满足以下条件：a溶解曲线单峰，窄而尖，否则可能有非特异性扩增；峰的位置横坐标一般在80度以上，这个温度为PCR产物的解链温度，如果在75度附近，可能是引物二聚体，miRNA染料法检测时，溶解曲线的峰的位置可能在75度附件b琼脂糖电泳为明亮的一条带，条带一般在100bp以上，如果设计引物时PCR产物在100bp一下，需要仔细辨认是否为引物二聚体；引物二聚体的条带一般在50b

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问PCR求助赐教

帝尊

勤换枪头，严格按操作流程操作，及时保养。

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问怎么用qpcr来检测病毒的滴度呢，样品是293t细胞产生的病毒，需要怎么处理吗？

汤姆卜丽波

通过在载体的长末端重复序列区（LTR）设计定量引物，利用荧光实时定量PCR测定重组慢病毒中LTR拷贝数来测定病毒颗粒数和有效感染的病毒颗粒，通过慢病毒颗粒数与实际有活力病毒滴度的比较，可以计算得到重组慢病毒感染效率．

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问qpcr的引物应该有什么网站或者工具可以检查它的扩增效率吗？每次设计的都不太好用

balalaLy

引物设计的软件在设计过程中就有引物质量的评价反馈，也可以到pubmed上blast一下

4 回答73 围观

问384孔板，rt-qpcr实验结果的处理？

balalaLy

跟96孔板的处理一样啊，只是工作量大了而已

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问为什么细菌的16s用KOD酶有时候跑不出来，同样的条件taq酶可以呢

bamboopiggy

kod是高保真的酶，不会产生错配，但是效率有点低，taq酶保真性差，但是扩增能力强。

3 回答132 围观

问在进行线粒体DNA PCR扩增时用限制酶酶切有什么作用，除了分段，获得目的的DNA还有别的吗？

bamboopiggy

不知道你的实验目的，但是一般酶切就是为了分开或者验证什么。

3 回答100 围观

问乙肝病毒荧光定量多少正常？

汤姆卜丽波

乙肝病毒荧光定量也就是PCR检测，正常值小于100IU/ml，如果大于100IU/ml，就是阳性的结果，也就是携带了乙肝病毒。

4 回答99 围观

问荧光定量pcr检测解脲支原体dna阳性说明什么？

秋秋欣欣

解脲支原体阳性，提示存在解脲支原体的污染

4 回答94 围观

问怎么确定很好的荧光定量PCR的引物，具体看哪些参数进行区分呢？

汤姆卜丽波

引物最好位于编码区5’端的300-400bp,无二级结构（自由能小于58.61KJ/mol），长度一般在17-25碱基之间，G+C含量45-55％，TM58-62

3 回答106 围观

问请问克隆引物和qPCR引物有什么区别，可以用qPCR引物做基因克隆用吗？

bamboopiggy

看你的实验目的，克隆的引物一般是在基因的起始和结尾设计，但是qPCR的引物的产物一般是50-200bp左右的，如果你要克隆50-200bp左右的片段，就可以用qPCR的引物。

3 回答490 围观

问请问qPCR引物合成出来大概多久内要用完？怎么样验证一下我放了很久的qPCR引物是否还可以用？

天一湖医者

如果放入-20度的话，可以一年。

5 回答239 围观

问请问我的目的基因的本身GC含量就比较高，该怎么样设计克隆引物？

秋秋欣欣

克隆引物就正常设计就可以，退火温度可稍微设置高一点

3 回答84 围观

问荧光定量的标准曲线是否是必需的？

天一湖医者

荧光定量的标准曲线是非常必需的。

4 回答156 围观

问qPCR曲线形状解释

汤姆卜丽波

模板浓度太高了，在基线期内就起峰了，仪器会默认起峰的线条仍为基线部分，将扩增曲线往基线位置下拉，因此你的曲线下滑，这种情况大家也不要慌，可以减小基线终点（例如基线期默认 3 - 15 个循环，改为 3 - 10 个循环），重新分析数据，一般都能得到一个比较好的结果

3 回答113 围观

问PCR条带弥散严重，怎么解决呢？

天一湖医者

1.酶量过高。减少酶量;酶的质量差,调换另一来源的酶。2.dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。3.MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。4.模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng。

4 回答99 围观

问1.引物二聚体严重是怎么回事？2.CT值偏大（CT值的大于等于30）是什么原因呢？3.体系双扩增的原因？

天一湖医者

引物设计不合理，两条或一条引物的3`端有互补序列，造成自己配对延伸而扩增。建议重新设计引物，，或者降低退火温度、增加模板和引物的量试下。

3 回答139 围观

问无特异性扩增，全为引物二聚体是怎么回事？

李小栋UI65

引物效果不好可能是由于引物间存在互补序列

4 回答81 围观

问PCR求助

bamboopiggy

你这不是正常的melt curve，数据不能用了。找一下原因，是试剂还是机器的原因。

4 回答131 围观

问UCSC验证别人已发表文献的引物出现no match，什么原因？

bamboopiggy

是不是方向问题？有的软件要求reverse方向的引物要反向互补才能对比上

3 回答104 围观

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