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科研学霸天团，48小时有问必答

问做wb半定量为什么内参总是调不一致

未来9

一：如果单独上样可以出现，可以排除蛋白本身的问题，但混合一起加时却跑的不齐，最大的可能就是胶的问题，胶配的不均匀导致蛋白跑的不在同一水平。二：就是抗体孵育问题，不知你是用孵育盒，还是用封膜孵育，一定要保证膜与抗体充分接触，保证孵育效果。三是显影剂是预混还是混合好的，注意混合比例

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问哪个牌子的雌激素受体拮抗剂好用啊？

bamboopiggy

AZD9496，应该是阿斯利康产的，有个叫百奥莱博的公司卖

3 回答82 围观

问做southern时为什么用酶切产物来跑胶，而不是直接用基因组DNA跑胶呢

bamboopiggy

因为基因组DNA，需要将其切割成大小不同的片段，才能进行杂交，一般用限制性内切酶来切。

1 回答115 围观

问构建的融合蛋白，为什么看不到红色荧光！

bamboopiggy

你质粒构建的时候,去掉你那个基因的stop code了吗？另外注意rfp的读码框别移位了。

2 回答109 围观

问这是形成引物二聚体了吗？但是为什么产物也很多

bamboopiggy

看位置是引物二聚体，只要有你的目的条带，你不要管这个二聚体就好。至于产物也多的原因，是因为你pcr反应的底物和酶，包括引物本来就是过量的，所以够合成你的目的条带。

3 回答126 围观

问求大佬给点思路/::<

迟C迟

把酶量减少，酶切时间减少，再检查一下你的载体序列，是不是还有这两个酶识别的位置。

3 回答122 围观

问请问是所有的DNA染料都需要避光4度保存吗？

迟C迟

尽量避光保存。现在商业化的DNA染料还是比较稳定的，不必过分担心。

3 回答148 围观

问请问DNAmarker长时间放在室温下，会导致跑不出来条带或条带弥散不清晰吗

迟C迟

一般不会，我们实验室都是常温放置的。如果出现条带弥散的情况，可能考虑是不是电泳缓冲液需要重新配置了。

3 回答277 围观

问请问离心柱型质粒小提试剂盒中的CP3吸附柱与离心柱型通用型DNA纯化回收试剂盒中的CB2吸附柱有什么不同吗

dxywode

离心柱型质粒小提试剂盒中的CP3吸附柱采用碱裂解法裂解细胞并提取质粒。其基于离心纯化柱能够在高盐状态下特异性地与溶液中的DNA 结合，而在低盐状态下进行DNA 洗脱的特性，实现质粒DNA 的快速纯化。使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于各种后续试验操作，如：酶切，PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染部分细胞等。离心柱型通用型DNA纯化回收试剂盒中本试剂盒采用特殊的离心吸附材料，既能

2 回答174 围观

问SSR分子标记如何定位基因

迟C迟

简单重复序(SSR)也称微卫星DNA，其串联重复的核心序列为1一6 bp，其中最常见是双核苷酸重复，即(CA) n和(TG) n。主要通过微卫星序列两端互补序列设计引物，通过PCR反应扩增微卫星片段，由于核心序列串联重复数目不同，因而能够用PCR的方法扩增出不同长度的PCR产物，将扩增产物进行凝胶电泳，根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率。在真核生物中，存在许多2-5bp简单重复序列，称

3 回答2610 围观

问构建重组载体转化大肠后测序，序列总有突变，可以从那些方面分析原因？

bamboopiggy

首先把你的模版拿去测序，我遇到过因为模版有问题，结果怎么改条件都不行。2.如果实在不行，设计引物，把突变的地方再给它突变回来。我当时就是发现模版也有mutation，只能自己给它纠正回来

3 回答131 围观

问DNA在什么条件下保存？

whilt-shirt

一般是-80℃保存，但是短期内用完的话可以放4℃

4 回答726 围观

问EMSA实验为什么shift有两条带

whilt-shirt

1）曝光或者成像时间过长。2）封闭时间不足或者效率不高。3）洗涤效果不佳。4）实验过程中膜没有一直处于湿润状态。

3 回答165 围观

问细胞分选单克隆之后一般多少天能长起来呀？

丁香粉猪猪

干细胞填充后，通常需要3-4周开始增生，3个月左右达到最佳效果。

3 回答128 围观

问直接提取DNA的电泳图发现有两条带，且与目标大小不一致

猪美美的小蘑菇

你的marker是多大的，如果marker使用没有错误的话，下面两条带看着像引物二聚体

2 回答333 围观

问AAV病毒纯化方法及感染细胞的实验方法，及相关注意问题？

丁香实验

AAV的纯化1）向病毒浓缩液中添加固体 CsCl 直到密度为1.41 g/ml（折射率为1.372）；2）将样品加入到超速离心管中，用预先配好的 1.41 g/ml CsCl 溶液将离心管剩余空间填满；3）在 175,000 g 下离心24 小时，以形成密度梯度。按顺序分步收集不同密度的样品，取样进行滴度测定。收集富集有AAV 颗粒的组分；4）重复上述过程一次。5）将病毒装入100 k

1 回答209 围观

问病毒做TCID50确定滴度的问题

丁香实验

如果有cpe而没有荧光，应该修饰区域的丢失。我之前遇到过这种情况。

1 回答440 围观

问为什么病毒纯化中peg6000沉淀不能溶解？

丁香实验

自己做个结论，是资料上使用的离心机和我使用的离心机不一样，我使用的相同转速，离心力要大于资料上的，在做了离心力换算，调整转速后，问题解决了。所以，以后看见资料上写转速的，一定要小心了，很可能就是一大坑。

1 回答284 围观

问如何提高DNA提取纯度？

丁香实验

手工可以用吸附柱，全自动用磁珠的比较多。一般来说柱提法要比磁珠法提取的纯度要高，楼主还是换用柱提法的试剂盒吧，QIAGEN，天根，百代BIOG都有柱提法的试剂盒。

1 回答350 围观

问DNA琼脂糖凝胶电泳关于上样的问题

mpark

For DNA with size less than 150 bp, try to run native PAGE, DNA over 200 bp, try to run 2% agarose gel (60V for 30 minutes). If you want to run 4% agarose, try to use low melting temperature agarose i

4 回答358 围观

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