求助LC/MS检测circRNA翻译产物的问题

原文链接

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6440158/#

本文作者利用circRNA-seq技术探索到一个感兴趣的circRNA，circPPPR12A，

其中fig5e中作者利用pulldown技术拉下次该circRNA可能翻译的多肽和Flag的融合蛋白，并进行后续的LC/MS氨基酸测序，我的问题是

1.fig5f上没什么没有flg的标记呢？

因为切下来的应该是带有flag的融合蛋白，后续的检测应该带有flag的标签，

2.fig5e中检测抗体是抗flag抗体，如何确定flag一定与circRNA翻译多肽融合呢？可后面质谱又仅仅显示circRNA翻译多肽的标记？

3.质谱的检测为什么不能全覆盖该多肽的序列，本文中说只检测了76%的序列信息，这是为何，有改进策略吗？

谢谢各位老师，望不吝赐教，深表感激！！！