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关于CRISPR 全基因组筛选中sgRNA文库扩增

相关实验:全基因组CRISPR-Cas9基因敲除和转录激活筛选实验

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dxy_buabfnce

刚刚接触这个技术,在看Zhang Lab给的protocol里面关于扩增sgRNA文库的步骤有些疑惑。首先他建议【repeat for a total of 1 electroporation per 10,000 sgRNAs in the library.】如何确定在一次电转当中获取的sgRNA数量呢?

以及为了保证screen的效果,要求覆盖率要至少500,在扩增sgRNA时写道【the total number of colonies is greater than 100 colonies per sgRNA in the library. 】这里如何确定每一条sgRNA的克隆数量超过100呢?如果实在平板上数出100个单克隆的话,怎么确定每一条sgRNA都超过100呢?

希望有大哥能解答小弟的疑惑,感谢!

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1 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

尝试结合荧光呢?用荧光强度表示。

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