关于CRISPR 全基因组筛选中sgRNA文库扩增

刚刚接触这个技术，在看Zhang Lab给的protocol里面关于扩增sgRNA文库的步骤有些疑惑。首先他建议【repeat for a total of 1 electroporation per 10,000 sgRNAs in the library.】如何确定在一次电转当中获取的sgRNA数量呢？

以及为了保证screen的效果，要求覆盖率要至少500，在扩增sgRNA时写道【the total number of colonies is greater than 100 colonies per sgRNA in the library. 】这里如何确定每一条sgRNA的克隆数量超过100呢？如果实在平板上数出100个单克隆的话，怎么确定每一条sgRNA都超过100呢？

希望有大哥能解答小弟的疑惑，感谢！