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就是用cDNA作为模板的时候,我延伸时间变成了2s,然后循环数是35,然后上样25微升
Eason老歌迷
出了不少杂带了呗?有很多原因,可能是引物的特异性不高。也可能是酶的用量偏高或酶的质量不好。可能是 Mg2+浓度偏高。或者是 反应缓冲液未完全融化或未充分混匀。也可能是外源DNA污染。
天一湖医者
可能循环的次数过多。 适当增加模板的量,减少循环次数。或者酶的用量偏高或酶的质量不好。 应降低酶量或调换另一来源的酶。 退火温度偏低,退火及延伸时间偏长。应提高退火温度,减少变性与延伸时间,也可采用二种温度的PCR扩增。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
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