浪子在天涯
合成的引物后,退火用klenow fragment补齐,酶切后用T4连接酶连接到相同酶切的质粒中,通过DH5α转化,没有菌落长出,不知道什么问题?
Eason老歌迷
菌落PCR的假阳性非常高,应该挑取多个阳性菌株,加入抗生素小摇之后将菌液送去测序,然后再选取正确的菌株进行重组表达,因为,还有可能存在载体上根本没有目的基因的情况,当然就不表达了
Topmicro
重组质粒不表达的原因很多,你需要用排除法,转化条件是否合适,抗生素浓度是否正确等等,不过最简单的方法就是再重复一次。分子实验与其去找原因不如重复一遍来的简单。
天一湖医者
1,测序检查你的插入序列有无问题,如移码或者起始密码子设置有误; 2.你的质粒是否需要特殊的诱导或培养条件;如最常见的Lac Z启动子需要IPTG诱导; 3.你的培养基是否有启动子的抑制物或阻遏物,
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