重组质粒的连接、转化及筛选

一、连接反应将约10ng的载体DNA转移到无菌微量离心管中，加入至少4倍摩尔量的外源DNA片段，然后加入10×T4 DNA连接酶缓冲液（ligase buffer）1μL，T4 DNA连接酶0.5μL——1μL，加无菌超纯水至10μL体积，充分混匀后用微量离心机将液体全部收集至管底，于16℃保温过夜。二、E.coli DH5α感受态细胞的转化1. 从一70℃冰箱中取200μL（效率高时只需50μL