ECOR1做单酶切后去磷酸化，为何连接不出重组的目的质粒？

丫丫9

2015-03-14

质粒来源的载体和目的基因都用 ECOR1做单酶切，之后都去磷酸化，摩尔比1:3连接，为何连接不出重组的目的质粒？师姐师兄们双酶切的摩尔比是1:3-1:5，是不是单酶切的摩尔比不是这个，和双酶切不一样？恳请同仁赐教~~

赵志斌_001

2015-03-30

有帮助

建议单酶切后不要去磷酸化了，载体和基因比例1：10左右，连接好后涂板，然后菌落PCR（一条通用引物+一条特异引物）鉴定10个左右的单克隆，有阳性的就行了。

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