DNA纯化

A.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Ep管中，12000rpm离心1min,

丢去上清夜，收集菌体。

B.加入400ul裂解液（40mMTris-醋酸，20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8）混匀,置于37oC水浴1hr。

C.然后加入200ul5mol/L的氯化钠溶液，混匀后于13000rpm离心15min。

D.取上清液，用苯酚抽提2次，氯仿抽提1次。

E.加两倍体积无水乙醇，1/10体积醋酸钾(3M

,pH8.0)，-20度保存1小时后，13000rpm离心15min，弃上清液，沉淀用70%乙醇洗2次；置于室温干燥后，溶于50ulTE溶液中，置4度保存备用。

先用10ml含适当抗生素的GBM过夜培养Delftia sp.，第二天4000rpm离心10min收集菌体，用Washing TE(50mmol/LTris-HCl pH8.0,10mmol/LEDTA pH8.0)洗菌体2次，之后将菌体充分悬浮在5ml 1×TE缓冲液中，先后加入0.5ml 5mg/L的蛋白酶、0.5ml 10% SDS，轻轻混匀后50℃放置3h~5h，接着用等体积的Tris饱和苯酚抽提2次，苯酚/氯仿/异戊醇抽提一次，氯仿抽提一次后，乙醇沉淀DNA，用自动移液器吸管头将絮状DNA沉淀块吸附到Ep管中，70%乙醇洗2次，干燥后溶于适当1×TE或ddH2O中。

提取细菌DNA，采用CTAB / NaCl法

1.在5ml LB中接种单个菌落，在30°C下培养过夜，

2.将1ml种子培养液加入100ml 2％LB中，并在37°C和220r / min下培养16小时；

3.以5000r / min的速度离心10分钟，并丢弃上清液。

4.加入10ml TE进行离心和洗涤后，用10ml TE溶解细菌，充分混合，然后在-20℃储存以备后用。

5.取3.5ml细菌悬浮液，并添加184μl10％SDS混合均匀，加37μl10mg/ ml蛋白酶K，混合均匀，在37℃孵育1小时

6.加入740μl5mol / L NaCl，然后加入512μlCTAB / NaCl，充分混合，并在65°C孵育10分钟。

7.加入等体积的氯仿/异戊醇，混合均匀，以10000r / min的速度离心5分钟，然后保存上清液。

8.在上清液中加入等体积的苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），混合均匀，以10000r / min离心5分钟，然后保存上清液。

9.加入0.6倍的异丙醇，混合均匀，以10000r / min离心5分钟，收集DNA沉淀物，并用70％乙醇离心洗涤DNA沉淀物。

10.用1ml TE溶解DNA，加入RNaseA至终浓度20μg/ ml，并在4℃下保存。

通过CTAB / NaCl方法提取的DNA具有更高的纯度，更少的蛋白质杂质和更长的存储时间。编辑者更喜欢在孵育步骤5中添加最终浓度为20μg/ ml的RnaseA，以便最后没有RnaseA污染。每个步骤都更加详细，并且获得的DNA可用于Southern印迹法。

建议：DNA可以在-20°C下长期保存，但应尽量减少反复冻融，否则会影响DNA质量。