Eason老歌迷
emsa又叫凝胶迁移,它是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。
emsa注意事项:
1.DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。
2.同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。
3.检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。
4.在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。
天一湖医者
EMSA实验需要设置许多组对照实验。
EMSA非放射性探针设计要注意:
(1)防止错位配对、封闭成环,排除目标序列以外结合位点的
(2)防止产生空间位阻
(3)注意AT/GC比例
(4)EMSA探针不宜太长,一般是几十碱基对。太长会产生过多结合位点导致结果分析困难,还会产生超级螺旋结构而掩盖结合部位。
(5)建议采用Biotin或红外荧光标记,尽量不要采用DIG标记。,探针两端都有标记以提高灵敏度
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