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科研学霸天团,48小时有问必答
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tcga中mirna数据没有正常组,都是肿瘤组,如果想做差异分析怎么办
Dr_劉医生
做阳性对照也可以,不一定非得要无疾病的空白对照。按肿瘤的类型进行miRNA数据的分层,一样可以做组间差异化分析
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问
每个孔的自由探针量是一样的,为什么片子显示的看起来不一样啊
Dr_劉医生
探针只是作为特异性抗体结合靶蛋白,探针分子量一样只是保证每孔和底物(也就是靶蛋白)结合的特异性抗体量的一致,具体WB跑出来效果,和靶蛋白结合的量是相关的。
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问
高胆固醇培养基(MRS—CHOL)怎么做成固体的,直接加琼脂就可以吗?还是有其他的固体培养基?
汤姆卜丽波
有厂家会卖如果你觉得自己调不好可以买商品化的,一般我们都是直接加琼脂,你可以做个预实验找个最佳量
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问
扩增某菌内源质粒上的片段
毛利小五郎的徒弟
引物设计不恰当,你重新改变下引物设计
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问
linker的通用引物怎么设计
你好几和户
引物1F:酶切位点+GCCACC+ATG+Histaq+基因1的头部序列。引物1R:基因2的头部序列+linker+基因1的尾部序列。引物2F:基因1的尾部序列+linker+基因2的头部序列。引物2R:酶切位点+基因2的尾部序列。引物1F和1R扩增基因1,引物2F+2R扩增基因2;然后前面2个扩增的结果为模板,用引物1F和引物2R做PCR,扩增出完整序列后做双酶切连接,做出来就结束了。
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问
Geo数据合并后,基因数量减少好多,这正常吗?
毛利小五郎的徒弟
是不是有重复的,或者同一类的归类了
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问
求助:为什么扩增的重复性那么差呀?
你好几和户
考虑1、引物的浓度、长度、G + C含量、批间差、性质和选择;2、引物/模板比率和相互作用;3、热循环仪型号和厂商;4、变性时间、复性温度、延伸时间、循环次数和时间及批间温度;
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问
质粒化转
李彤彤通
理论上不会影响 DH5a的生长。
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问
提质粒方法求助
毛利小五郎的徒弟
不是越大越好,而是适中,建议你先预实验确定一下合适浓度
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问
求助大佬:分枝杆菌电转化长糊
guokeguiren
求助大佬怎么制备分枝杆菌感受态细胞,我只背的就没有电转成功过,哭死
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问
在网上买了两种重组质粒和感受态细胞,但转化了几次,每次的结果都只有一种能转化出来长出菌落,另一种培养基上啥都没有(两种条件都一)
bamboopiggy
你是不是两种质粒的抗性不一样啊?否则就太奇怪了
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问
loading buffer体积如何计算?
哎呀呀呀呀哎
什么体积呢 是指上样的时候加的体积吗?loading一般有undefined,undefined,等等,将终浓度稀释到undefined即可。比如undefined的loading,2ul loading+8ul的样本即为10ul undefined上样浓度
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问
连接产物转化完铺板不长菌
申东熙老伯
很可能目的条带和载体没连接上,建议重新连接。不长菌就是没连接上,菌一长一大片可能是平板抗生素失效,也可能是菌液浓度过高。
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问
胶回收片段260/230值很低可以用做pcr模板吗
毛利小五郎的徒弟
可以的,图中条带过亮可能是胶质分布不均匀,回收片段可以做pcr模板
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问
RNA电泳结果分析求助!
毛利小五郎的徒弟
看图片上,电泳背景有点乱,是不是做胶时胶质分布不均匀,存在气泡?下次可以避免下。
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问
maldi-tof MS出来的峰对应的质荷比就是分子量吗,峰的Z都是1吗,求解答,谢谢各位了
毛利小五郎的徒弟
质荷比不是分子量,需要后续计算。
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问
western blot 制胶总是向两边歪
bamboopiggy
你的胶板没有密封好,在凝固过程中还是有漏液的,所以两边漏出去了,建议你先用水试一下你的胶板漏不漏,再往里加胶
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问
DNA Poll down实验哪位大神做过
你好几和户
PCR反应中的dUTP标记混合物是biotin-11-dUTP
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问
Bodipy493/503染细胞内脂滴淬灭快?
毛利小五郎的徒弟
你试剂前期保存有没有避光呀,如果照射过淬灭很快
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问
GFP荧光强度与什么有关?
balalaLy
荧光激发光强度,蛋白表达量、蛋白稳定性有关
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