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【求助贴】小鼠APP/PS1基因型鉴定
bamboopiggy
胎鼠和成年鼠的基因鉴定方式是一样的,建议你加一个成年鼠的做阳性对照,看是不是pcr过程中出现问题了。
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问
请问大家有遇到过内参的CT值变化的情况吗
balalaLy
有时候酶降解了也会出现内参ct值变化从而导致结果出现偏差
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问
质粒表达和染色体表达有什么区别
dxy_gwrp7ndq
这是由于染色体DNA携带的基因所编码的产物,在细菌新陈代谢中是生存所必须者;而质粒携带的基因所编码的产物并非细菌的生存所必须者。因此质粒可以在细菌间传递与丢失
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问
蛋白表达不出来
bamboopiggy
先提一下质粒送测序,确定你的质粒还在
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问
目的基因ct和外参ct
天一湖医者
可以用,不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象。
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问
大肠杆菌XL1BLUE转化
天一湖医者
建议重新配置LB培养液。 确保菌种是新鲜的,如果过于老旧,建议重新涂盘(抗生素选择盘),挑克隆。最后实在不行,可以适当降低培养液中抗生素的浓度
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问
将含有环状RNA序列的连接产物转化后挑选数个单克隆摇菌提质粒,双切鉴定有目的条带,这些阳性质粒之间会有差别吗?
迟C迟
阳性克隆只是含有抗生素那段序列,成不成环不能保证,还需要再在阳性克隆里面挑选你要的。
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问
怎么判断感受态细胞是否好用,每次做转化都要两天才能长出来,是不是感受态的问题,质粒是18T载体,超级好连接的那种?
迟C迟
用酶切、PCR、测序 等方法验证长出来的菌落是否正确。可能是这一批感受态细胞活力不好,或者是培养箱温度不正常等等因素导致生长缓慢。
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问
CRISPR i如何设计靶向基因序列
府宅
可以在http://crispr.mit.edu/进行基因序列设计
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问
慢病毒转染细胞后筛选抗性基因的细胞需要怎么判断?
bamboopiggy
一般需要筛两周左右没有死细胞了,就可以了
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问
慢病毒转染细胞的时间多长?
bamboopiggy
最少48小时,我一般感染72h,甚至更长时间,看细胞的密度
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问
慢病毒转染细胞过程浓度多少?
秋秋欣欣
刚开始可以用96孔板或者24孔板做个浓度低度,设置不同MOI值的感染组,通常设立1,2,5,10,20,50,100的感染组别
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问
怎么找或者预测谷氨酸棒杆菌某氨基酸转运蛋白呢
府宅
可以通过上调氨基酸水平应用实时定量PCR证明其是否受存在转运蛋白。再利用绿色荧光蛋白与其构建融合蛋白,确定转运蛋白所在部位。
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问
外泌体载药
Omiget12
目前都在研究这块,具体结果还不确定,不过这个前提需要保证外泌体比较纯,浓度比较高。
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问
感受态细胞为什么师兄说买来的不好用,要自己制备的转化效率才高?
balalaLy
不一定。商品化的感受态应该比较稳定吧,除非是小公司的质量有问题。
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问
为什么转化涂板后第二天菌落长的特别多,老师说是不对的?
bamboopiggy
你是质粒转化,还是连接产物转化?如果是质粒,是可以的,如果是连接产物,那一般是假的
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问
测序差异越大的指标是否说明其对疾病的贡献也越大
秋秋欣欣
测序的结果只是基于现有的数据,文献以及大家上传上去的数据,有片面性,还需要进一步的用实验去验证,当然差异越大我们认为他越可能有贡献,并不能说明贡献相应的也就大。
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问
这个CNV与HCC的关系如何解读呀?
bamboopiggy
CNV指的是copy number variation,看你的这个文献是说,跟平均的CNV的一个差异值。
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问
琼脂糖凝胶电泳
bamboopiggy
AF488是耦连的抗体和蛋白结合的,琼脂糖凝胶是直接DNA跟染料结合的
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问
蛋白测序与mRNA测序具体应用方面有啥差别?
汤姆卜丽波
这个要根据你的实验目的,比如在研究DNA甲基化或者转录水平的调控时,只检测mRNA表达就可以了,但要研究某个基因功能的时候,通常要用到的过表达敲低技术时,检测其蛋白的表达将会比检测mRNA更有说服力,因为只有该基因表达成蛋白了,才能行使其生物学功能,从而对下游基因或细胞产生影响。对于检测临床标本或者动物组织中的基因表达,如果同时检测mRNA和蛋白并得到一致的结果将会更有说服力。
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