linker的通用引物怎么设计

相关实验：随机引物法标记 DNA

绵绵翠丝

2022-09-14

实验室小白一枚，想在质粒里插入两个基因，中间用linker连接，引物怎么设计，大概多长，需要包括酶切位点在里面吗？

2 个回答

土井挞克树

2022-09-15

有帮助

这个引物设计是比较复杂的事，你可以尝试在linker的引物中+GCCACC+ATG+Histaq+，这个是比较常用的引物

你好几和户

2022-09-14

有帮助

引物1F：酶切位点+GCCACC+ATG+Histaq+基因1的头部序列。引物1R：基因2的头部序列+linker+基因1的尾部序列。引物2F：基因1的尾部序列+linker+基因2的头部序列。引物2R：酶切位点+基因2的尾部序列。引物1F和1R扩增基因1，引物2F+2R扩增基因2；然后前面2个扩增的结果为模板，用引物1F和引物2R做PCR，扩增出完整序列后做双酶切连接，做出来就结束了。