求助大佬：分枝杆菌电转化长糊

大佬快救救孩纸吧，实在解决不了了。

问题描述和排除途径：

如上图，分枝杆菌电转后涂板，一天就长成这样的糊状。

实验过程：感受态制备：1%接种野生型分枝杆菌至50毫升7H9培养基，长至0.8-1.0，拿出放冰箱，4度冷孵1.5h，6000rpm离心十分钟，分别用25ml、12ml、6ml的冰10%甘油洗，最后用适量冰10%甘油重悬。电转：电转杯分别用酒精、无菌水，冰10%甘油洗涤两次，最后一次洗完后置于冰上，同时将质粒加入感受态，冰上半小时，转入电转杯，2500V、25uF、1000欧、2mm。

1.怀疑做感受态的菌本身有问题。

排除：换了不同来源的保种，糊。

2.做感受态的菌抗性原因。

排除：一级种没有抗性，同批抗生素在大肠种使用也具有效果。

3.抗生素本身质量问题。

排除：加大抗生素比例，在常规基础上扩大了2倍、3倍，糊。

4.转化质粒问题。

排除：选了不同抗性的重组质粒和空质粒，糊。

5.质粒加的多少问题。

排除：200ul的感受态，分别尝试过加如800ng、1700ng、3400ng等不同量，糊。

6.电转后涂布的多少问题。

排除：一般用200ul重选，试过10ul、50ul、80ul、100ul、200ul等不同量，糊。

7.感受态问题。

排除：不同人做了感受态，感受态的浓度，4度冷孵时间都变过，糊。

7.感受态污染。

排除：同一管感受态电转复苏后，部分涂布，同时划线，划线没杂菌。