用DH5a转化的时候除了42度热激1分钟，再一小时复苏是不是还有别的方法？

1. 首先明确你的问题？

转化方法一般指化转法和电转法，你所指应该是指化转法，俗称Cacl2感受态转化法

2.化转法原理是

氯化钙法是将处于对数生长期的细菌置于0℃的cacl2低渗溶液中,使细胞膨胀,同时ca+使细胞膜磷脂层形成液晶结构,然后经42℃热脉冲处理后,细菌细胞膜的液晶结构发生剧烈扰动,随之出现许多间隙,致使通透性增加,外源DNA分子便进入细胞内。

3.化转法步骤

1. 将连接产物加入到一个1.5ml无菌的离心管中，并放置冰上。2. 将盛有感受态细胞菌的管子握在手上使菌液迅速熔化。3. 立即将100 ul 感受态细菌加 入到管中，轻轻旋动，并放置冰上10 min 。4. 将管放入42℃水浴2 min 进行热刺激，然后加入1 ml LB 培养液于每一支离心管中。5. 于37℃摇床培养1 h。6. 将菌液离心剩100ul涂布于含合适抗生素的平板上，于37℃培养12~16 h。

4.别的方法是指不同于化转法，那就是电转法，感受细胞不同。

别的方法是指步骤的话，根据原理可以适度还操作步骤，如42度热激可以试试30S-120S之间，如1小时复苏也不固定，45min-1.5h貌似都可以，主要复苏，一方面时间短考虑细菌充分复苏，另一方面时间长考虑杂菌或者阳转过多不容易挑出来。

最好按照protocol来，不然浪费质粒和菌

我之前不管是做普通质粒转化还是自己构建连接后的转化都是热激之后冰上静置然后直接涂班，没有复苏那一步。

1、直接放37度水浴中，不转，这时候细胞非常脆弱，半小时候拿到150r/min摇床。

2、我们就用90秒的，复苏条件同1。

效果还不错，

转化除了热激法，还有电转化法，效率更高，但不是每个实验室都有仪器，热激转化能够满足我们需求了。

热激时间的确定与装感受态所用的离心管厚度有关系，所以你会看到不同的说明书上介绍的热激时间不一样，你可以自己做个梯度试一下，一般来讲30-90s之间都是可以的，当然转化率有些许的差异

我有师兄做过42度热激以后，冰上放置2min后，直接涂板的。但是我没有试过。建议你还是按照正常的程序来做吧，不容易出问题。