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筛选出 200+ 条实验概况及操作方法
RNA- 蛋白复合物中寡核苷酸靶向的RNaseH切割保护实验
寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解实验是分析 RNA 蛋合复合物(RNP,核糖核蛋白颗粒)的方法,无论是对于粗提物还是提纯后的样品,对分析 RNP 的结构域的结构都非常有效。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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果蝇 RNA 的大规模制备
本方法可从 100 只果蝇或约 2g 果蝇胚胎中制备 RNA。
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采用 PACE 分析 RNA- 肽相互作用实验
聚丙烯酰胺共电泳(poiyacrylamide coelectrophuresis,PACE ) 检测是相对较晚发展起来的定量分析蛋白质、肽与 DNA 或 RNA 相互作用的方法。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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酵母三杂交系统检测和分析 RNA- 蛋白相互作用实验
酵母三杂交系统(yeast three-hybrid system)可用于分析蛋白质与 RNA 间的相互作用。在酵母三杂交系统中,RNA 蛋白质相互作用导致报道基因的转录,可以通过细胞生长、克隆颜色或特异的酶活性检测蛋白质与 RNA 的相互作用。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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液相法筛选 cDNA 表达文库中 RNA 结合蛋白实验
将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上,然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法是筛选 RNA 结合蛋白研究中最常用的技术。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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Northwestern 筛选蛋白表达文库实验
Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库(融合蛋白的 N 端由载体序列编码,C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码),进而诱导融合蛋白表达,并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤膜上,以标记的 RNA 探针进行筛选,最终获取能与靶 RNA 分子特异性结合蛋白质的 cDNA。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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天然 RNA 文库筛选与蛋白特异性结合的 RNA 序列实验
细胞中,蛋白质与 RNA 结合参与多种生理调控和发育过程。在 mRNA 的加帽,多聚腺苷酸化,剪切,核外运,翻译起始及降解等过程中都存在着蛋白质与 RNA 的直接相互作用。在发育的各个阶段,RNA 结合蛋白可以通过与 mRNA 的相互作用调控基因的表达。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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小规模快速制备果蝇RNA
盐酸胍可在裂解细胞的同时快速抑制 RNA 酶的活性,本方法利用这特点来分离果蝇 RNA
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酵母总 RNA 的制备
可从酵母细胞提取质量良好的总 RNA.
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苯酚法制备酵母 tRNA
通过 DEAE 纤维素柱纯化,除去少量 DNA、大分子 RNA、蛋白质、多糖等杂质,最后得到各种氨基酸专一性 tRNA 的混合物.
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真菌总 RNA 的制备
从各种不同的真菌中提取总RNA。
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酵母前体 mRNA 剪接提取物实验
真核生物前体 mRNA ( pre-mRNA ) 的剪接分为两步,即先从前体切去内含子,然后将两个外显子连接在一起形成成熟的 mRNA。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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通过高等真核生物无细胞提取物分析 mRNA 的降解实验
细胞的环境、复制周期的状态和分化状态的改变会引起一些 mRNA 半衰期的改变。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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制备体外剪接反应用HeLa细胞核和胞质S100提取物实验
胞核提取物可以用于前体 mRNA 的剪接,S100 提取物中虽然包括许多剪接因子,但它不具有剪接活性,因为它只含有剪接所必需的部分 SR 蛋白,不过该提取物中补充一种或多种 SR 蛋白后就可以进行有效的剪接。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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纯化剪接因子 SR 蛋白实验
前体 mRNA ( pre-mRNA ) 剪接因子 SR(serine/argininc rich,富含丝/苏氨酸)蛋白家族是将剪接体组装到前体 mRNA 上的重要参与者。SR 蛋白是重要的剪接因子,该家族的不同成员可以在体外或体内指导选择性剪接位点的选择。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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反义 RNA 的制备实验
RNA 也可以由线状 DNA 为模板,通过 RNA 聚合酶(如T3、T7 或 SP6 ) 在体外合成。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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U 系列小核糖核蛋白颗粒的纯化实验
剪接体 ( spliccosome ) 是真核生物中从初级转录物中切除内含子的催化单位。剪接体包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 种小核糖核蛋白颗粒(snRNP ) 和大量的非 snRNP 蛋白。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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RNA 干涉实验
RNA 干涉(RNA1) 是指在真核细胞中引入双链 RNA ( doubt-stranded RNA,dsRNA ) 分子从而导致具有序列同源性的基因产生特异件基内沉默(gene silencing ) 的现象。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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miRNA 克隆实验
在细胞中表达的 RNA 除了我们所熟悉的 mRNA 以外,还有大量不编码蛋白质的非编码 RNA(noncoding RNA,ncRNA),非编码 RNA 在细胞中起着非常重要的作用,如 rRNA 和 tRNA 维持着基因的表达,还有一部分则起着调控基因表达的作用。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
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随机 RNA 文库的 SELEX 筛选实验
随机RNA文库的SELEX筛选实验可用于:(1)体外诊断;(2)体内治疗等。
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