Northwestern 筛选蛋白表达文库实验

RNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤膜上，以标记的 RNA 探针进行筛选，最终获取能与靶 RNA 分子特异性结合蛋白质的 cDNA。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。

来源：丁香实验

操作方法

Northwestern筛选蛋白表达文库实验

―、材料与设备 1. 表达库：多采用 λ 噬菌体载体构建表达库，可根据需要选取载体。可购买预先制备好的表达库（Stratagenc 公司，Clontech 公司等均有售），也可以自己制备载体库。如 λgt11、λZAP 或 λORF8 等载体的多克隆位点前有 lacZ 基因，使融合蛋白能被 TPTG 诱导表达。改进型载体如 λTriplEx 可以使三个读码框都得到翻译，保证了蛋白质的表达。此外，