酵母三杂交系统检测和分析 RNA- 蛋白相互作用实验

RNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

酵母三杂交系统（yeast three-hybrid system）可用于分析蛋白质与 RNA 间的相互作用。在酵母三杂交系统中，RNA 蛋白质相互作用导致报道基因的转录，可以通过细胞生长、克隆颜色或特异的酶活性检测蛋白质与 RNA 的相互作用。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。

来源：丁香实验

操作方法

筛选已知RNA序列的相互作用蛋白

一、引入 RNA 质粒和 cDNA 文库通常首先将 RNA 质粒转化到宿主菌株-L40coat 内，得到包含 RNA 质粒的细胞，再转化一个融合了转录激活区的 cDNA 文库（杂交 RNA 对宿主细胞几乎没有毒性，与用于双杂交筛选的一些杂交蛋白诱饵不同，所以，没必要将两个质粒共转染），转化混合物铺于缺乏亮氨酸和组氨酸的培养基上，不需要保持 RNA 质粒（如 ADE2 或者 URA3 选择）。这