RNA 干涉实验

RNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

RNA 干涉（RNA₁）是指在真核细胞中引入双链 RNA ( doubt-stranded RNA，dsRNA ) 分子从而导致具有序列同源性的基因产生特异件基内沉默（gene silencing ) 的现象。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。

来源：丁香实验

操作方法

化学合成siRNA分子实验

一、材料与设备 1. 化学合成的正义与反义 RNA 单链分子。 2. 2X 退火缓冲液（200 nmol/L KAc，4 mmol/L MgAc2，60 mmoI/L Hepes-KOH pH 7.4)。 3. NuSieve GTG 琼脂糖凝胶（BMA 公司，www.bmaproducts. com) 。 4. 核酸转染试剂（如 Lipofetamine 2000)。 5. DEPC

体外转录合成siRNA分子实验

一、材料与设备 1. 工人合成的 DNA 寡核苷酸（带有 T7 启动子）。 2. SilenceTM siRNA Construction 试剂盒（Ambion 公司）。 3. 核酸转染试剂（如 Lipofetaminc 2000) 。二、操作方法 1. 设计并合成两条长 29 nt 的 DNA 寡核苷酸（作为合成 siRNA 的模板），它包含一段 21 nt 的 siRNA 序列和

采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子

一、材料与设备 1. siRNA 表达载体（含 U6 或 H1 启动子）。 2. 人工合成的 DNA 寡聚核苷酸。 3. 限制性内切核酸酶。 4. T4 DNA 连接酶。 5. DNA 凝胶回收试剂盒。 6. 2X 退火缓冲液（200 nmol/L KAc，4 mmol/L MgAc，60 mmol/L Hepes-KOH， pH 7.4 )。 7. U6 或 H1 启动子片段。

采用RNaseⅢ制备siRNA分子实验

一、材料与设备 1. 合成的 DNA 寡核苷酸。 2. 靶基因 cDNA。 3. T7 RNA 体外转录试剂盒（Promega 公司）。 4. DNase Ⅰ 和单链特异性的 RNase。 5. 重组的 Dicer 酶。 6. 蛋白酶 K ( 0.2 mg/ml）。 7. 1X Dicer 反应缓冲液（250 mmol/L NaCl，30 mmol/L HEPES ( pH 8.0