如何高效的向原代细胞转染SiRNA？转染试剂？转染时间？

　选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验有很大影响，它直接影响实验的结论和结果，因此必须选择低毒性转染试剂，以观察转染试剂的毒性是否较低。有一个简单的方法，看转染的过程和要求，比如要求的细胞密度越大，说明毒性越大，

1.设计合成有效的siRNA　RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要，优的设计可以用小的工作浓度取得满意的沉 默效果，减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是，需要同时设置阴性对照以排 除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有效性。　2.合成的siRNA注意纯度和工作浓度　siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA，siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。siRNA的工作浓度和siRNA的设计、细胞种类、目标基因有关。建议一定进行相关的预实验优化各条件。　3.选择合适的siRNA转染试剂选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验有很大影响，它直接影响实验的结论和结果，因此必须选择低毒性转染试剂，以观察转染试剂的毒性是否较低。有一个简单的方法，看转染的过程和要求，比如要求的细胞密度越大，说明毒性越大，例如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短，说明毒性越大。除了低毒性，好操作简便，例如有的转染试剂要求转染前换无血清培养基或低血清培养基，转染后又要有血清培养基。实际上，由于培养条件的频繁变化，可能会对细胞表达模式产生影响，对后续的mRNA和蛋白分析也同样产生影响，终影响实验的可靠性。

siRNA：lipofectamin2000为1：0.01-1：0.1（pmol：ul）一般情况下，此范围内都可获得高的转染效率。细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后，进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感，孵育4-6小时后，除去复合物，更换培养基。