答：如果是本来就有正确结构的蛋白是不需要加DTT的，如果是变性的蛋白，并且其一级结构中含半胱氨酸，那么缓冲液中加DTT，并且逐渐减少DTT浓度。DTT是防止错误的二硫桥形成的，蛋白会先向正确结构形成二硫键，但是这个过程较为缓慢，如果直接不加还原剂，那么正确的和错误的二硫键都会形成。所以慢慢的降低DTT，使蛋白形成正确的结构而不至于形成错误的二硫键。如果4xloading buffer中不含有DTT就按

答：1.可能你的蛋白有一定降解，分子量小的蛋白有时候出现这种情况几率比较好的。目的蛋白有部分降解，但是未降解部分依然可以和抗体结合2.可能是WB到了该蛋白的同源二聚体3.可能抗体有时候特异性不高会出现别的杂带

答：HE 染色，即苏木精一伊红染色法，苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 HE 染色后是可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况，因为炎症细胞有自身的特点，通常细胞核较大，核质比大， H & E 染色后，细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。因

答：根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制：

答：一、染色原理与显色效果天狼星红染色原理：天狼星红是一种强酸性染料，通过静电作用与胶原纤维中的碱性基团（如赖氨酸、羟脯氨酸）结合。染色后，胶原纤维呈红色，肌纤维呈黄色，细胞核通常用苏木素复染呈蓝色715。显色特点：在偏光显微镜下，胶原纤维可呈现双折光现象（Ⅰ型胶原呈黄色或红色，Ⅲ型胶原呈绿色），从而区分胶原类型1015。Masson三色染色原理：通过多种染料组合（如酸性品红、苯胺蓝）对不同组织成分进