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怎样根据蛋白分子量配分离胶和浓缩胶浓度??

相关实验:免疫印迹(immunoblotting)

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夜雨阑珊

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9 个回答

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眼镜蛇001

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分离胶浓度要根据蛋白分子量来,一般网上都有指导。浓缩胶一般4-6%,主要是为了压缩蛋白,让所有蛋白在同一个起跑线,理论上是比分离胶浓度低越多效果越好。我们专业从事生物技术服务,性价比高,结果有保障,可先实验后付款。

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sanshiok2

有帮助

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凌晨三点Dxy

有帮助


根据蛋白分子量配分离胶和浓缩胶浓度的方法如下:


浓缩胶浓度的选择:浓缩胶通常用于使样品中的蛋白质在电泳开始前集中成一条薄带,以便进入分离胶。浓缩胶的浓度基本不变,可以根据目标蛋白的分子量选择适当的浓度。例如:


对于20-100 kDa的分子量,选择10%的浓缩胶。

对于30-120 kDa的分子量,选择8%的浓缩胶。

对于20 kDa以下的分子量,选择12%的浓缩胶。

对于120 kDa以上的分子量,选择6%的浓缩胶。

分离胶浓度的选择:分离胶的浓度直接影响蛋白质的分离效果。根据目标蛋白的分子量,选择合适的分离胶浓度。一般建议如下:


对于分子量较小的蛋白质(如actin以下),可以使用12%的分离胶。

对于分子量较大的蛋白质(如几百kDa),可以使用6%的分离胶。

对于一般的小蛋白,12%或10%的分离胶通常都能跑。

凝胶的制备:在制备凝胶时,需要注意以下几点:


根据所需的凝胶浓度,按照标准配方表配制分离胶和浓缩胶。

在加入过硫酸铵(APS)和四甲基乙二胺(TEMED)之前,确保其他成分已经充分混合。

在加入APS和TEMED后,立即进行灌胶操作,以避免凝胶过早凝固。

注意事项:


确保使用的试剂新鲜且无沉淀。

在操作过程中,注意安全,特别是处理具有神经毒性的TEMED时,应在通风良好的环境中进行,并佩戴适当的个人防护装备。

凝胶的制备和使用应在适当的温度和时间控制下进行,以确保凝胶的质量和电泳的效果。


以上信息综合了网上的相关内容,以指导如何根据蛋白质的分子量选择合适的分离胶和浓缩胶浓度。

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府宅

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根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制:

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dxy_gwrp7ndq

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一般actin以下的可以跑12%胶

红线左右可以用12%或10%跑

几百KD的很大的用6%的胶

小蛋白12%的10%的一般都能跑

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迟C迟

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分离胶浓度的选择主要取决于目的蛋白的分子量大小,不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样,以下表格数值仅供参考

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天一湖医者

有帮助

目标蛋白分子量越小,mono/bis百分比越高,目标蛋白分子量越大,mono/bis百分比越小

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未来9

有帮助

根据蛋白电泳实验指导的书。
不同浓度的胶对应不同范围分子量的蛋白

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whilt-shirt

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浓缩胶浓度基本不变,20-100kda的分子量选择10%,30-120选择8%,20以下选择12%,120以上选择6%

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