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我们一般认为每个样品表达的管家基因(House Keeping)的量应该是一致的,用做内参检测应该是恒定不变的。其实不是,所以这里提示大家,如果检测某一个内参差异很大时,我们可以更换另一个内参检测!
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内参不齐,说明你在蛋白定量时不准确,没有把所有的样品都稀释成一致的浓度,若有未变性的样品建议重新定量变性,可换一种定量方法,比如BCA蛋白定量法。若没有样品了,可根据你的内参结果调整上样量,等内参基本一致的时候,做出来的目的条带才有说服力。
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先用Image J计算内参的灰度值,然后选择其中一个样本作为参照,用这个参照样本的灰度值除以其他各组样本的灰度值再乘以各组上样量,就得到最终各自的上样量
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