细胞培养与基因治疗技术指南

第 0 天：T 细胞培养和活化 使用前将足够体积的 PRIME-XV T Cell CDM 预热至 37˚C 至少 15 分钟。注：为避免温度循环，请在预热前确定所需的总体积。 将冻存管在 37˚C 水浴中轻轻搅拌解冻 1 分钟。或者使用新分离或收获的细胞。 小心地将冻存管中的细胞全部转移到装有 10 mL PRIME-XV T Cell CDM 的 15 mL 锥形管中。 将细胞以 300 g

活化和扩增培养基的制备1. 通过添加以下推荐浓度的细胞因子：500 IU/mL 的重组人 IL-2 (rhIL-2)、10 ng/mL 的 rhIL-12、10 ng/mL 的 rhIL-18 和 10 ng/mL 的 rhIL-21，为每 1x106 个富集的 NK 细胞制备 1 mL 的接种培养基（PRIME-XV NK Cell CDM）。2. 通过将步骤 1 中细胞因子的相对浓度翻倍，为每

以下方案经过优化，可用于在 2D 培养容器中扩增来自脂肪、骨髓和脐带的人类间充质干细胞（hMSCs）。 包被程序 注意：要在 PRIME-XV MSC Expansion XSFM 中培养 MSCs，组织培养板或培养瓶必须预先涂上细胞附着基质。强烈建议使用 Cellnest（FISI，货号1063967）涂覆培养表面以保持一致性。也可使用其他类型的基质（PRIME-XV 人类纤连蛋白，FISI

完全培养基的制备 本文概述两步法，在 8 天内进行 3 次补料。第 0 天和第 3 天的前两次补料需要使用分化培养基，而第 6 天的第三次补料需要使用完全培养基，其细节概述如下。注意：请在每次补料的当天制作新鲜的相应培养基。 制备分化培养基时，在锥形管中加入适量的 PRIME-XV Dendritic Cell Maturation CDM，并补充 GM-CSF（400 IU/ml）和 IL-

以下方案推荐用于大多数细胞。根据细胞的类型，可能需要进一步优化。 使用细胞特定的方案（机械分离或酶消化）制备细胞悬液后进行离心，以获得细胞沉淀。 小心地吸出上清液，留下最小体积的培养基刚好覆盖细胞沉淀，以减少 PRIME-XV FreezIS 的稀释倍率。 加入足够的预冷（2-8℃）PRIME-XV FreezIS 溶液，以获得建库所需的细胞密度。注意：最佳密度可能因细胞类型不同而变化。 轻轻吹打

细胞复苏是将冻存在液氮中的细胞解冻之后重新培养，细胞恢复生长的过程。细胞复苏的基本过程可分为如下几步：1. 从液氮中取出细胞安瓿或冻存管，置 37℃ 水浴中迅速融化，一旦冰块消失即将冻存管从水浴中取出。2. 用 70% 乙醇擦洗冻存管外部以减少污染机会。3. 吸取冻存管内容物缓慢加入含 4-5 ml 培养液的 T-25 细胞培养瓶中，置 5% CO2、37℃ 细胞培养箱培养，次日换液。也可通过离心

贴壁细胞：以 HeLa 细胞的传代培养为例 选取生长密度 80% 左右即处于生长对数期的 HeLa 细胞，在超净工作台中操作，吸去培养皿中的旧培养基，加入 1-2 mL 的 PBS 溶液，轻轻润洗，漂洗细胞以除去残留的血清。 吸去培养皿中的 PBS 溶液，加入 1-2 mL 0.25% 胰蛋白酶消化液（消化液能够覆盖细胞即可），吸弃培养基，将培养皿置 37℃、5% CO2培养箱消化 2～3 min