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为啥有些蛋白的WB是两条条带?

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迷糊的人间清醒


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6 个回答

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123456李阳

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可能有两种原因:一个是该蛋白出现了同源二聚体;第二种可能是蛋白有降解,但是依然可以和抗体结合吧。

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王堇文

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1.可能你的蛋白有一定降解,分子量小的蛋白有时候出现这种情况几率比较好的。目的蛋白有部分降解,但是未降解部分依然可以和抗体结合

2.可能是WB到了该蛋白的同源二聚体

3.可能抗体有时候特异性不高会出现别的杂带

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dxy_xextz7w2

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首先排除非特异性条带(抗体很难保证只和目的蛋白结合)

原因一:蛋白修饰,磷酸化,糖基化等,如果修饰的只是你目的蛋白的一部分,就会出现两条带,其中一条带会比你的目的蛋白分子量大一点

原因二:蛋白降解,降解部分比原来分子量小,但仍包含抗原位点

原因三:蛋白多聚体 还原剂正常工作,同源二聚体做出来是一个条带,出现两条带可能是实验控制不太好,还原剂可以把链间二硫键打开,把二聚体变成单体,如果还原剂出问题有些二聚体没打开,另一条在高分子量区

原因四:剪切变异体 一个基因通过选择性剪切产生不同分子量大小的蛋白,但都包括你选择的抗原位点,所以有几个剪切变异体就有几个条带

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毛利小五郎的徒弟

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两条条带可能是蛋白存在降解,形成的双条带

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sswei

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出现两条带是非常正常的现象.

抗体的原因:不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异,大部分都能检测到目的条带,但是有时能检测到非特异性的条带;

蛋白亚型表达的原因:一种蛋白有时检测压型很明显,有时不是很明显.参考了很多文献的结果,均有此种情况出现,即使是大家都觉得很确定的蛋白很多时候也会出现不同的亚型.毕竟对很多蛋白我们的认识有限.这种情况不要怕的,尽管按照真实结果去处理,千万不要为了让结果好看或者符合大家的意思而去做修改.

3.实验技术的原因:曝光的时候会有底片轻微移动的现象,出现很接近的两条.

4.目的蛋白部分降解,也可能会出现相近的两条带.如何去掉杂带?先找找目的蛋白的分子量,这样就能分辨出那个条带是想要的.尽量减少蛋白的降解在样品的处理过程中.

杂带:若是多克隆抗体或是抗体浓度过高就可能有杂带.但是目的条带也会在其中,除非样品中靶蛋白表达过低才会出现没有目的条带的情况,封闭时间不够也可能出现杂带

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balalaLy

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如果一个蛋白有两种修饰体,而这两种修饰体这个抗体都能识别,那就会在对应的两个位置出现条带

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