求解：WB提取蛋白时，什么情况要加DTT？作用是什么？比例多少？

在做还原电泳的时候需要加DDT，作用是强还原性，可以打开二硫键，一般比例是0.5M，不过也有0.2M等其他比例

如果跑的蛋白容易形成多聚体，需要使用Laemmli 缓冲液（62.5 mM Tris (pH 6.8)、2% SDS、10% 甘油和 100 mM DTT）作为裂解液，最好新鲜配制，DTT长时间会失效，可另外补充。

DTT的作用是DTT可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。DTT对蛋白的影响是DTT也可以对蛋白质中二硫键进行还原。DTT是DL-Dithiothreitol的缩写，中文名为二硫苏糖醇。DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。

DTT分子量为154.25，如果你的上样体积是V得话，那么你就要称DTT的质量为154.2undefined0.undefinedV。

为了确定蛋白质的一级结构，DTT可以将cys上的二硫键打开，使之成为线状多肽链，这样也便于抗体识别并结合特定的位点[2]。对于包埋于蛋白质结构内部的二硫键，DTT通常作用较弱，这类二硫键的还原需先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如盐酸胍、尿素或SDS）[3]。DTT在离子状态下才有作用，pH7-9.5时作用最强，pH降至3以下可终止其作用。PCR反应体系中加入DTT可以使蛋白质从DNA上释放出来，便于DNA和引物的结合，提高扩增效率。

作用浓度：DTT浓度太低起不到保护作用，浓度太高又会破坏结构。建议在0.5mM~1.5mM之间。有的抗体说明书会给出目的蛋白的最佳使用浓度。

如果是本来就有正确结构的蛋白是不需要加DTT的，如果是变性的蛋白，并且其一级结构中含半胱氨酸，那么缓冲液中加DTT，并且逐渐减少DTT浓度。DTT是防止错误的二硫桥形成的，蛋白会先向正确结构形成二硫键，但是这个过程较为缓慢，如果直接不加还原剂，那么正确的和错误的二硫键都会形成。所以慢慢的降低DTT，使蛋白形成正确的结构而不至于形成错误的二硫键。

如果4xloading buffer中不含有DTT就按照4xloading buffer：DTT=4:1的比例加DTT.

dtt是作为还原剂来用的，有抗氧化的作用。0.5-1mM/L