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病毒感染—细胞实验宝典
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实验方法
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问
怎么用qpcr来检测病毒的滴度呢，样品是293t细胞产生的病毒，需要怎么处理吗？
汤姆卜丽波
通过在载体的长末端重复序列区（LTR）设计定量引物，利用荧光实时定量PCR测定重组慢病毒中LTR拷贝数来测定病毒颗粒数和有效感染的病毒颗粒，通过慢病毒颗粒数与实际有活力病毒滴度的比较，可以计算得到重组慢病毒感染效率．
4 回答
478 围观
问
病毒滴度的测定有哪些方法，什么原理
汤姆卜丽波
可以用稀释计数法，不同稀释比例的量去感染细胞然后镜下计数，在计算病毒滴度
5 回答
2234 围观
问
老师们，请问为什么igg比igm量多得多，但是测抗体滴度的时候，滴度越高代表是近期感染
Dr_劉医生
因为这两个抗体产生时间就不一样，在某一时间点的量肯定就不一样。IgM是近期感染的抗体，一般在感染后3-5天出现。IgG是在IgM产生后出现的，在感染后10-15天出现。
2 回答
402 围观
问
用慢病毒包装的方式做基因敲降，病毒滴度低，感染THP-1细胞，用puro筛选后，大部分细胞死掉了，怎么样提高病毒滴度？
喵喵喵柏
Thp-1不好转染，亲测原代细胞好转。建议重新摸puro的浓度，可能是浓度的问题，设置浓度梯度，看细胞死亡的数量。病毒滴度是包装病毒的厂家设计的，有不同种的浓度，这个应该和厂家沟通，或者提高加入病毒的量，并调整转染病毒的试剂的含量，及时换液
3 回答
842 围观
问
请问原代培养的细胞转染需要注意什么?
天一湖医者
1.细胞接种：一般做转染前一天接种/铺板（细胞计数大约undefined10^4cell/ml），使做转染前细胞密度在30-50%；如果细胞是原代细胞，接种密度可以密一些，细胞计数在undefined10^6cell/ml；悬浮细胞可以在转染当天接种/铺板（细胞计数大约undefined10^4cell/ml），待细胞状态稳定后做转染前细胞密度30-40%。2.为了能在使用时有较好的转染效果，第一次使用建议您用24孔板做，每孔2ul转染试
4 回答
786 围观
问
瞬时转染目的病毒及空载病毒测OD值的问题
西柚味的芋圆
肯定不会，，检测时的激发光的波长完全不一样，所以没有干扰
5 回答
418 围观
问
使用脂质体瞬时转染，预实验是用空载体还是含有目的基因的载体做呢？还是两者都用
yyygo
脂质体细胞转染用目的载体做，预实验也相当于是摸索条件的了
1 回答
3213 围观
问
腺病毒感染细胞检不出来
huarenqiang5
考虑问题出在包装环节上，腺病毒包装设计到好多方面。1. 293细胞是否为低代数；2.Pac I酶切是否完全；3. 酶切后是否去除内毒素；4. 助燃效率是否高；建议你注意以上几个环节，一般可以解决。
3 回答
668 围观
问
求助：EB病毒的体外培养与细胞感染
土井挞克树
体外目前常用的就是B淋巴细胞和鼻咽上皮细胞。可以尝试悬浮感染法。
2 回答
596 围观
问
细胞感染支原体的原因是什么？
bamboopiggy
因为人身上可能带支原体，在操作过程中很容易带到细胞中去，并且细胞间如果有支原体污染的，再不注意的话，气溶胶更会造成污染。
4 回答
284 围观
问
大家分享一下流式细胞实验步骤？
Dr_劉医生
丁香通都有，非常常见的实验步骤，大家要善于使用丁香园的平台，具体见图
4 回答
379 围观
问
请问大家做细胞实验是用无动物成分重组蛋白还是用传统重组蛋白
dxy_qfkx8il3
用无动物成分重组蛋白应该也可以，但感觉用传统重组蛋白稳妥一些。
3 回答
333 围观
问
求助：请问细胞实验中，取不同时间点进行细胞增殖的测定，其中时间点0h是什么意思？
汤姆卜丽波
对。就是药物刚加进去就测，相当于空白对照之外的一个对照，为了做曲线用的
3 回答
431 围观
问
细胞实验母液如何配置成为工作液？是根据说明书结合文献？我看那种文献配置方法不一
土井挞克树
主要看说明书和预实验的结果，文献只是参考。
4 回答
846 围观
问
求助：预实验可以只做细胞实验吗？
你好几和户
预实验可以只做细胞实验就可以了，动物实验时间太长了，费用太高了
3 回答
541 围观
问
慢病毒感染THP-1后，细胞贴壁严重
邢晓华I45H
细胞贴壁原因：与电荷有关，37℃时在2min内细胞之间即可形成键，该键可对0.01%胰蛋白酶起作用且仅发现于细胞之间，而细胞与底物之间则无；8min后才有稳定的键形成，也就是形成细胞贴壁现象。
3 回答
2025 围观
问
想用荧光显微镜观察病毒感染细胞后的形态，是用普通光学显微镜还是需要荧光显微镜
bamboopiggy
这个要看你的病毒带不带荧光，，如果带荧光，可以用荧光显微镜，顺便还可以看一下转染效率
2 回答
961 围观
问
慢病毒感染T细胞
dxy_gwrp7ndq
由于慢病毒对该细胞有一定的毒性作用，需要调整并降低感染的MOI值，并且在感染后4小时、8 小时、12 小时对细胞进行观察，若发现细胞状态变差时，则需要立刻对细胞进行换液操作，使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液。
3 回答
921 围观
问
请问慢病毒感染细胞24h后换液加抗生素筛选细胞大片脱落的原因是？
balalaLy
我一般是24小时如果状态太差就换液，换液后第二天才加抗生素。如果状态好就补几ml培养基继续培养到第二上午换液，下午加抗生素。如果还是死很多细胞说明转染失败，重新包病毒吧
5 回答
1898 围观
问
急求如何筛选与病毒感染相关的细胞因子风暴相关宿主蛋白，谢谢各位大佬！
Eason老歌迷
具体参看这篇文章。作者用高通量筛选鉴定SARS-CoV-2感染必须基因研究者使用人的GeCKOv2文库病毒（~0.2 MOI）感染A549ACE2细胞，嘌呤霉素药筛9天，随后0.3和0.01 MOI SARS-CoV-2分别感染巴细胞，感染24h检测核衣壳（N）蛋白表达，感染6天后存活的细胞被提取DNA用于高通量测序。用3种方法（Robust rankaggregation，RIGER weigh
1 回答
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