腺病毒感染细胞检不出来

小马向前冲

2022-11-24

最近在做腺病毒相关的实验，我们用293T细胞包装AAV-CMV-目的片段重组体的病毒，并测量病毒滴度对细胞进行感染初步检测病毒质量，但是不论是感染细胞12h,24h,72g,十几天都试过了，WB检不出来病毒，不知道是哪里出问题了，不知道各位大佬有没有什么想法？

我们具体的步骤是：293T收毒之后，用碘克沙醇进行处理，然后密度梯度离心，收取分层的40%部分，进行透析，然后纯化拿到病毒，QRT检 DNA CT值能到12/13，为什么感染细胞见不到呢？

毛利小五郎的徒弟

2022-11-25

有帮助

你可以加大收取部分40%更改为60%

huarenqiang5

2022-11-25

有帮助

考虑问题出在包装环节上，腺病毒包装设计到好多方面。

1. 293细胞是否为低代数；

2.Pac I酶切是否完全；

3. 酶切后是否去除内毒素；

4. 助燃效率是否高；

建议你注意以上几个环节，一般可以解决。

Dr_劉医生

2022-11-25

有帮助

试试密度梯度离心加大转速和增加时间看看，是不是分离细胞的问题。