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腺病毒感染细胞检不出来

相关实验:腺病毒包装

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小马向前冲

最近在做腺病毒相关的实验,我们用293T细胞包装AAV-CMV-目的片段重组体的病毒,并测量病毒滴度对细胞进行感染初步检测病毒质量,但是不论是感染细胞12h,24h,72g,十几天都试过了,WB检不出来病毒,不知道是哪里出问题了,不知道各位大佬有没有什么想法?

我们具体的步骤是:293T收毒之后,用碘克沙醇进行处理,然后密度梯度离心,收取分层的40%部分,进行透析,然后纯化拿到病毒,QRT检 DNA CT值能到12/13,为什么感染细胞见不到呢?

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3 个回答

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土井挞克树

有帮助

你可以加大收取部分40%更改为60%

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huarenqiang5

有帮助

考虑问题出在包装环节上,腺病毒包装设计到好多方面。

1. 293细胞是否为低代数;

2.Pac I酶切是否完全;

3. 酶切后是否去除内毒素;

4. 助燃效率是否高;

建议你注意以上几个环节,一般可以解决。

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Dr_劉医生

有帮助

试试密度梯度离心加大转速和增加时间看看,是不是分离细胞的问题。

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