腺病毒包装

微生物实验

最新修订时间：2023-05-26

简介

目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而使表达满足实验需求。

原理

将目的基因包装成病毒来感染细胞，腺病毒(Adenovirus，Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型，大多数Ad载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。

应用

1.应用于体内接种疫苗。 2、应用于信号转导，基因转位，Co-IP，动物实验，干细胞研究等科研实验。 3、可以完成较高难度的克隆构建，包括具有细胞毒性作用基因的腺病毒构建，在短时间内完成从原始质粒到病毒DNA的构建工作。 4、产生滴度高，非常适于基因治疗。

来源：丁香实验

操作方法

🔥 腺病毒包装

1、细胞转染（以转染 6 孔板为例）① 250 μl DMEM 和9 μl PEI 配成 Mix 1，静置 5 min 以上。② 250 μl DMEM 和 1 μg 穿梭质粒、2 μg 包装质粒（即腺病毒骨架质粒），配成 Mix 2。③ 将 Mix 1 和 Mix 2 混合，涡旋振荡混匀，瞬离后，静置 15 min 以上，以便有充足的时间形成 DNA-PEI 复合物。④ 将静置后的混合液逐滴加入

腺病毒包装流程、注意事项与常见问题

腺病毒介绍重组腺病毒载体是基于人腺病毒 5 型（Ad5），其基因组是 36kb 长的线性双链 DNA，是一种复制缺陷型腺病毒载体系统。具有以下几个显著优点：感染范围广，几乎可以感染所有的细胞系、原代细胞和部分组织；感染效率可高达 100%；对外源基因容载能力大（可以高达 8Kb）；不整合基因组；滴度高，操作方便。因此，重组腺病毒是一种最具有潜力的基因递送工具。最常用的腺病毒包装体系有 AdEas

病毒滴度检测——腺病毒

腺病毒滴度检测采用TCID50法：滴度单位：PFU/mL，是空斑形成单位，为Plaque Forming Unit permL的缩写。1、加病毒将 96 孔板中的 11、12 两列各加入 100 μL 5% FBS 的 DMEM，做阴性对照；96 孔板中的 A-H 排，依次各加 100 μL 标记为 8 个连续梯度稀释的病毒样品溶液，盖上第一个板并在37°C CO 2培养箱中培养；同样步骤操作第二