病毒感染—细胞实验宝典

指利用不同的载体物质携带质粒DNA 通过直接穿膜或膜融合的方法将外源 DNA 分子导入真核细胞，使外源基因表达，从而针对某个基因和蛋白质的功能进行一系列生物学功能研究的方法。

慢病毒 （Lentivirus） 是以 HIV-1 为基础，使用疱疹病毒 VSVG 外壳蛋白发展起来的工具载体，其毒性基因已被剔除并以外源性目的基因取代，属于假型化病毒。区别于一般的逆转录病毒，慢病毒具有更广的宿主范围，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。重组慢病毒载体慢病毒可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

腺病毒是一种线型双链DNA 无包膜病毒，它的 DNA 和核心蛋白形成的内核，蛋白外壳是直径约 80nm 的正二十面体，由 240 个六面体和 12 个位于正二十面体顶部的五面体构成。腺病毒粘附后，五邻体蛋白上的精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸与细胞表面的整合素 αvβ3 和 αvβ5 结合并相互作用使腺病毒进入细胞。

腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）是一类细小病毒，基因组为单链DNA，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。通常需要腺病毒或疱疹病毒帮助其在体内复制扩增。重组腺相关病毒（recombinant AAV，rAAV）是利用 AAV2 型基因组与不同血清型的衣壳蛋白基因组结合产生的混合体病毒载体，可将外源基因高效递送至生物体。

MOI: 复感染指数，是指病毒对细胞的感染能力，MOI 越高，细胞越难被感染。通常把某株细胞有 80% 被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的 MOI。MOI=（病毒滴度 × 病毒体积）/ 细胞数目

在哺乳动物细胞中产生稳定的细胞系时，如果表达系统携带耐药基因，则通过在培养基中添加抗生素药物来选择稳定转染/转导的细胞是一种有效的方法。由于哺乳动物细胞对抗生素的敏感性因细胞类型而异，因此必须通过单独的杀伤曲线实验来确定杀死非转染或非转导细胞所需的抗生素的最低浓度