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大家分享一下流式细胞实验步骤?

相关实验:细胞传代实验

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huarenqiang5

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4 个回答

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Dr_劉医生

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丁香通都有,非常常见的实验步骤,大家要善于使用丁香园的平台,具体见图

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毛利小五郎的徒弟

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第一步
细胞悬液样本制备
流式细胞术的分析检测建立在单个细胞的基础上,所以制备合格的单个分散的细胞悬液是非常关键的一环。
对不同来源和不同形式的样品,根据各种样品的特点可选择不同的分散方法。
单层培养细胞、血液、各种脱落细胞等样品
标本经过简单的制备悬液,离心分离处理,就可以得到分散较好的单个细胞悬液,是理想的流式细胞术检测对象。
不同组织来源的实体组织标本
采用酶消化法、机械法和化学试剂处理法来分散细胞。
石蜡包埋组织单细胞悬液
可使大量存档的临床资料重新得到研究与利用,从而扩大了流式细胞术的应用范围。样品制备一般通过切片、脱脂、水化、消化及终止消化后过滤再收集细胞悬液,去除碎片的单细胞悬液用 70% 乙醇固定保存
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流式细胞术实验步骤?

一、流式细胞术检测细胞胞膜分子

1. 细胞重悬:细胞处理计数后,用细胞洗液(含2% BSA的PBS)重悬细胞,使细胞浓度为1×107/mL;

2. 对照设置:空白对照、同型对照、待测样本每管取100uL上述重悬的细胞,使每管细胞数达到1×106/管;

3. 一抗孵育:空白对照管不加抗体,同型对照管和待测样本管分别加入5-20uL同型抗体和靶标抗体(具体使用量参照说明书),充分混匀,至4℃孵育30min或冬季可至于室温孵育30min,孵育期间每隔10min晃动一下反应管,使细胞和抗体充分反应;

4. 细胞清洗:加入适量细胞洗液,1000rpm离心5min,弃上清,反复洗涤2次;

5. 细胞重悬:使用100μL细胞洗液重悬细胞;

6. 二抗孵育:同型对照管和待测管分别加入适量的荧光标记的二抗,充分混匀,至4℃避光孵育30min或冬季可至于室温避光孵育30min,孵育期间每隔10min晃动一下反应管;

7. 细胞清洗:加入适量细胞洗液,1000rpm离心5min,弃上清,反复洗涤2次;

8. 上机检测:使用100-200μL细胞洗液重悬细胞,先测空白管和同型对照管,再测待测管。

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balalaLy

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流式细胞也分好多实验呢,一般都是先把细胞消化下来,然后染色,然后上机检测。不同的实验具体的步骤还会有差别,有的染色之前还要固定

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