大家分享一下流式细胞实验步骤？

Dr_劉医生

2022-10-24

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丁香通都有，非常常见的实验步骤，大家要善于使用丁香园的平台，具体见图

土井挞克树

2022-10-24

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第一步

细胞悬液样本制备

流式细胞术的分析检测建立在单个细胞的基础上，所以制备合格的单个分散的细胞悬液是非常关键的一环。

对不同来源和不同形式的样品，根据各种样品的特点可选择不同的分散方法。

单层培养细胞、血液、各种脱落细胞等样品

标本经过简单的制备悬液，离心分离处理，就可以得到分散较好的单个细胞悬液，是理想的流式细胞术检测对象。

不同组织来源的实体组织标本

采用酶消化法、机械法和化学试剂处理法来分散细胞。

石蜡包埋组织单细胞悬液

可使大量存档的临床资料重新得到研究与利用，从而扩大了流式细胞术的应用范围。样品制备一般通过切片、脱脂、水化、消化及终止消化后过滤再收集细胞悬液，去除碎片的单细胞悬液用 70％乙醇固定保存

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2022-10-24

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流式细胞术实验步骤？

一、流式细胞术检测细胞胞膜分子

1. 细胞重悬：细胞处理计数后，用细胞洗液（含2% BSA的PBS）重悬细胞，使细胞浓度为1×107/mL；

2. 对照设置：空白对照、同型对照、待测样本每管取100uL上述重悬的细胞，使每管细胞数达到1×106/管；

3. 一抗孵育：空白对照管不加抗体，同型对照管和待测样本管分别加入5-20uL同型抗体和靶标抗体（具体使用量参照说明书），充分混匀，至4℃孵育30min或冬季可至于室温孵育30min，孵育期间每隔10min晃动一下反应管，使细胞和抗体充分反应；

4. 细胞清洗：加入适量细胞洗液，1000rpm离心5min，弃上清，反复洗涤2次；

5. 细胞重悬：使用100μL细胞洗液重悬细胞；

6. 二抗孵育：同型对照管和待测管分别加入适量的荧光标记的二抗，充分混匀，至4℃避光孵育30min或冬季可至于室温避光孵育30min，孵育期间每隔10min晃动一下反应管；

7. 细胞清洗：加入适量细胞洗液，1000rpm离心5min，弃上清，反复洗涤2次；

8. 上机检测：使用100-200μL细胞洗液重悬细胞，先测空白管和同型对照管，再测待测管。

balalaLy

2022-10-23

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流式细胞也分好多实验呢，一般都是先把细胞消化下来，然后染色，然后上机检测。不同的实验具体的步骤还会有差别，有的染色之前还要固定