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外泌体研究进阶必备宝典

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外泌体提取纯化(组织)
一、样品预处理1、提前将 Solution A2 置于 4℃或冰上融化并混匀;2、组织剪碎:在消毒器皿(置于冰上)中将组织剪切成 1 mm3~3 mm3左右的碎组织块(剪切得越小越好);3、组织碎片清洗:将组织碎块转移至离心管中,加入不少于10 倍体积的 1 × PBS 缓冲液,振荡混匀后 300 ×g(~2000 rpm)离心10 min, 弃上清;_为约7cm有效离心半径的离心机换算(≤2
外泌体提取纯化(细胞上清)
一、样品预处理1、取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于 25℃水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;2、样品初始用量:单次提取时的样品量建议细胞培养上清液不低于 20 mL;3、离心去细胞颗粒:将样品转移至离心管中,于 4℃以3,000×g(~5,200rpm)离心 10 min,去除样品中的细胞碎片;(注:若沉淀较多,可3000 g,10 min离心多次
外泌体提取纯化(血清-血浆)
一、样品预处理1、离心机在使用前先于 4℃预冷 10 min;2、取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于25℃ 水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上,如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;3、将样品按照500 μL 每管进行分装,不足部分用1×PBS 补足至500 μL;4、离心去细胞碎片:将样品转移至1.5 mL 离心管中,于4℃ 以3,000×g(~6,200 rpm)离心10 min,去除
外泌体提取纯化(血液)
一、样品预处理1、取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于 25℃水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;2、样品初始用量:单次提取时的样品量建议血清、血浆不低于200 μL;3、离心去细胞碎片:将样品转移至离心管中, 于 4℃以3,000 ×g(~6,200 rpundefined)离心10 min,去除样品中的细胞碎片(注:若沉淀较多,可3,000 ×g,10 min 离
外泌体提取纯化(乳液)
一、样品预处理1、取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于 25℃ 水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;2、样品初始用量:单次提取时的乳液量建议不低于25 mL;3、离心去脂:将样品转移至离心管中,于4℃ 以10,000 ×g(~9,500rpm)离心20 min,去除样品中的脂质及部分蛋白(注:离心后样品分为三层,上层为脂质层,下层为蛋白沉淀,中间层为乳清
外泌体提取纯化(尿液)
一、样品预处理1、取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后 于 25℃水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;2、样品初始用量:单次提取时的尿液量建议不低于20 mL3、离心去细胞碎片:将样品转移至离心管中,于4℃ 以3,000 ×g(~5,200rpm)离心10 min,去除样品中的细胞碎片(注:若沉淀较多,可3,000 ×g,10 min 离心多次至无明显沉淀
外泌体提取纯化(体液)
一、样品预处理1、取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于 25℃水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;2、样品初始用量:单次提取时的样品量建议肺泡灌洗液、腹水等不低于1 mL,建议1 次提取2-3 mL 体积;3、离心去细胞碎片:将样品转移至离心管中,于4℃ 以3,000 ×g(~6,200 rpm)离心10 min,去除样品中的细胞碎片(注:若沉淀较多,可
外泌体提取纯化(粪便)
一、样品预处理(1)粪便样本收集在无菌的宽口容器中,立即使用(收集样品后置于冰上)或冷藏(4°C)。(2)使用勺子将 3g 的粪便转移到预先称重的离心管中,向试管中加入预冷(2℃ ~ 8℃)的 30 毫升无内毒素 PBS(按照每1g 粪便对应 10 毫升 PBS 加入)。(3)通过涡旋振荡器充分混匀粪便样本 5 分钟。在此步骤中,将高速离心机和离心转子冷却至 4°C。(4)将混匀粪便的离心管放入高
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