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外泌体研究进阶必备宝典

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问外泌体电镜负染结果显示这样，是什么？

takuya0528

可以参考下JEV一篇关于外泌体不同形态的文章，PMID：28717422

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问外泌体提取（raw264.7细胞）

天花病毒

RAW264.7本身的培养也是一种原因，培养基里不加谷氨酰胺可以增加外泌体的分泌量。细胞状态好一点，外泌体含量也会多一些

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问瞬转后miRNA能在外泌体里稳定表达吗

晓雨知春来

瞬转后miRNA也能在外泌体里稳定表达。

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问外泌体纯化超速离心，亲和纯化，微流控，粒径排阻色谱

Omiget12

本人用过一款试剂盒，方法简单，提的外泌体也比较纯

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问请教各位作为标志物miRNA抽血清里的，外泌体里的，全血里的区别

genecreate

区别很大外泌体只是血液中很小的部分物质其包括的mi RNA种类少多了

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问超离提取外泌体，粒径大大如何优化

Eason老歌迷

你可以试试一步法。一步法蔗糖垫缓冲超速离心方法能够获得更好的产量、细胞外囊泡完整性更佳和蛋白质污染物也更少。分离出的细胞外囊泡的大小、形态、产量和表面标记蛋白表达均能够被正常检测和表征。一步法则直接将蔗糖垫用于样品中细胞外囊泡的浓缩，即体液或细胞上清液直接添加于蔗糖垫之上，收集蔗糖垫使用PBS稀释后再次离心得到细胞外囊泡即可。去掉了预浓缩步骤，也减少了沉淀形成的次数。

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问外泌体超离取上清看不到沉淀

genecreate

先保证提取到外泌体吧，杂质这个不能完全避免的

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问外泌体的生物记物是什么？

bamboopiggy

1.电镜检测：茶托型或一侧凹陷的半球形2.Western blot分子标志物检测：外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；细胞质蛋白，如肌动蛋白（Actin）和钙磷脂结合蛋白（Annexins）；参与生物功能的分子，如凋亡转接基因2互作蛋白X（ALIX）、肿瘤易感基因101蛋白（TSG101）、热休克蛋白（HSP70、HSP90），以及细胞分泌的特异性蛋白

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问请问外泌体的生物标志物如何选择，如何鉴定啊？

vae1476

正好最近在做，外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63、CD81和CD9)）、热休克蛋白家族（(HSP60、HSP70、HSPA5、CCT2和HSP90)以及一些细胞特异性的蛋白包括A33（结肠上皮细胞来源）、MHC-II(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素（不成熟的树突状细胞）。其中CD63、CD9、CD81以及TSG101、HSP70、ALIX等，是最常

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问单外泌体蛋白组检测方法有哪些？

异乡人hyq

邻近编码技术（Proximity Barcoding Assay，PBA），为高通量、多因子的单外泌体检测开辟了新的途径。

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问求助：有没有外泌体方面的大佬帮个忙，我想问下外泌体进入临床试验需要哪些前期实验。

汤姆卜丽波

至少要做完外泌体本身的分离鉴定，还要进行纯度和成分的检测，探究和疾病的关系，应用到动物实验

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问大家有没有提过植物细胞外囊泡或者叫外泌体或外泌体样纳米颗粒

天一湖医者

步骤：(1)上清液分离：将细胞培养后的培养基，离心去除杂质，分离出培养上清液；(2)一次提取：将步骤(1)所述培养上清液与外泌体提取液混合后进行孵育，孵育后得第一孵化液，对第一孵化液进行离心浓缩，得到含外泌体的浓缩液；(3)二次提取：将步骤(2)所述含外泌体的浓缩液加入无菌pbs溶解后加入外泌体提取液进行孵育，孵育后得第二孵化液，将第二孵化液进行离心收集底部沉淀，得细胞外泌体。

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问外泌体提取rna后，检测内参不齐，需要引入外参吗？

bamboopiggy

可以引入外参，但是要满足以下条件:1. 与待检的目的RNA在样本中具有一样的存在形式，即囊泡包裹状态存在；2. 在外泌体分离富集过程中与待检外泌体RNA具有一样的动力学行为；3. 在外泌体RNA提取及PCR检测过程中具有一样的效率。也即可以完整的模拟目的基因在整个液体活检过程中的动力学变化。

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问外泌体提取？提外泌体怎样才算的好？想请教大家一下。

府宅

WB检测可以发现样品中具有外泌体的标志物，可以一定程度上排除溶酶体、蛋白聚团、支原体等情。NTA粒径分析可以反应外泌体样品中粒子的群体特征，了解其纯度

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