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蛋白表达与分析

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问原核表达未诱导的比诱导的的目的蛋白都多

银焰之光

是不是样品跑反了啊，拿错了？怎么可能未诱导的样品中目标蛋白这么明显的表达了？建议重新电泳。如果是不经过诱导就能表达出来这么高量的目标蛋白，简直神了。目标蛋白经鉴定正确，为啥会影响纯化呢。

3 回答1260 围观

问要检测两个蛋白的表达，一抗的种属要不同，相对应的二抗是不是也要不同？

balalaLy

可以有两种组合：一种是一抗种属不同，比如，一鼠一兔，二抗就是对应山羊抗鼠和抗兔；还有一种是一抗种属相同但抗体的亚型不同，比如一抗是mouse IgG 2a和mouse IgG 1然后对应的二抗是山羊抗mouse IgG2a和 mouse IgG1.

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问原核表达IPTG诱导问题求助

sswei

反应条件较复杂，特别是对自己设计的引物来说，选择合适的退火温度，是需要慢慢摸索的，一般根据计算的退火温度降低5~10℃来进行首次扩增，如果出现了目的条带，且有杂带时，在逐步提高退火温度，以提高反应的特异性。此外，还有反应体系，电泳条件，时间等等因素。

4 回答1718 围观

问求助贴，WB检测BV2细胞中TLR4的表达一直跑不出来

sswei

无条带的原因很多，要逐一排除哦，比如：抗体用错，转膜出错，抗原无表达，试剂失效等，都会导致空白条带。

4 回答952 围观

问某个基因已经敲除了，理论上蛋白没有表达，为什么还能拉下来蛋白

土井挞克树

可能是抗体特异度差，将杂质的结合误认为目的蛋白

3 回答3049 围观

问wb条带分析|蛋白跑出泳道；条带显示不全

loveliufudan

电泳不均匀或者样品加载不均匀导致蛋白质跑出了浓缩胶范围，同时转膜也存在不均匀的问题，导致某些条带显示不完整或者缺失。此外，实验中也可能存在其他因素，如抗体浓度、蛋白质含量等问题，也有可能影响结果。

3 回答1883 围观

问Label free 定量蛋白质

loveliufudan

是否有必要需要视情况而定。以下是一些可能需要考虑的因素：实验目的：如果你的实验目的需要对蛋白质进行定量分析，并且需要比较样品之间的差异，那么做4D label free可能是必要的。样本类型：对于复杂的样本，如细胞或组织样本，可能需要用4D label free来克服样品中存在的复杂性。技术能力和经验：4D label free需要高级的技术能力和经验来正确分析数据。如果您或您的实验室没有相关的技

3 回答442 围观

问蛋白表达咨询

loveliufudan

可能的原因有很多。可能是DNA转化效率不稳定，或者蛋白表达和折叠过程中存在问题，也可能是您的操作问题。以下是一些可能的原因和解决方案：1.转化效率不稳定：在您的实验中，37摄氏度生长可能会影响BL21(DE3)的转化效率。转化后，应该在室温下快速混合细胞和LB培养基，恢复期一般为1-2小时。然后将细胞在LB/ampicillin板上培养过夜。您可以考虑增加培养时间，以获得更好的转化效率。2.蛋白表

2 回答627 围观

问沉默基因后多长时间检测下游蛋白变化？

bamboopiggy

一般48-72小时之间，收样品进行检测就可以

3 回答404 围观

问wb条带目的蛋白下面一片黑

求求不要翻车啦

可能是封闭时间比较短，洗膜没洗干净，一抗浓度适当降低，等等

4 回答921 围观

问一般一次上样的蛋白总量是多少，跟目的蛋白的表达量有关系吗？

balalaLy

跟目的蛋白的表达量有关系，目的蛋白表达低，总的蛋白上样量得加大

3 回答1440 围观

问要做乳酸菌膜蛋白差异分析，可是用了贝博的膜蛋白提取试剂盒感觉效果不好，问一下提膜蛋白的师兄师姐们，有没有好的提取膜蛋白的方法，谢

bamboopiggy

根据你的实验目的，你选一个要用的试剂盒吧，虽然我不能提公司的名字（要不就说我打广告），但是你应该可以搜到。对于这些比较细的实验，建议不要买国产的试剂盒，虽然便宜，但是做不出好结果。

2 回答492 围观

问药物作用于癌细胞，Bax蛋白表达降低，是否能说明不是通过凋亡而导致细胞死亡？

bamboopiggy

你不能只检测Bax啊，把bcl2还有caspase3检测一下再说，还要加个rescue的实验

2 回答580 围观

问蛋白表达

whilt-shirt

有可能是未裂解完全，建议重新裂解试试

3 回答333 围观

问WB显影时内参蛋白有条带，但是目标蛋白没有，显示信号弱出不来条带，有什么解决的办法吗？之前显出来过一次，还是同样的条件就不行了

whilt-shirt

增加目的蛋白一抗浓度或者换用1.5mm的胶增加上样量试试

3 回答615 围观

问最近在做某蛋白的入核。提了质核分离蛋白跑WB,发现这个蛋白在质里少了，在核里也少了。请问大家这是为什么？

申东熙老伯

蛋白在细胞的表达量有很多未知的变化，你的细胞有经过准确的计数吗？

3 回答384 围观

问蛋白表达是包涵体怎么办

dxy_kdzvaizq

1. 降低诱导温度2. 降低诱导剂浓度

5 回答836 围观

问蛋白表达

bamboopiggy

你有没有跟beads结合以后的？上清中有，并不代表bind下来的就多啊。你先看看beads能binding下来多少

4 回答360 围观

问用刺激物刺激细胞看某个蛋白表达量的时候，设计了对照组0h，1h，2h刺激，对照组细胞什么时候提蛋白？

bamboopiggy

按照你刺激的时间收啊，刺激0h的，就0h收，1h的1h收，2h的2h收。ctrl的，0h收就好。

3 回答313 围观

问目的蛋白表达破碎时用pbs表达在沉淀，换成buffer a蛋白又表达在上清是为什么呢

冷泉港蛋白

1.纠正下不是蛋白表达在上清还是沉淀，是溶解，我感觉这样说更合适2.你的蛋白应该是疏水性较强，以包涵体的形式存在，简单的说就是形成了多聚体。3.用pbs溶解不了蛋白，因此在沉淀里面；用buffer a，含有变性剂或表面活性剂，破坏了蛋白之间的疏水作用，溶解了部分蛋白出来。

4 回答567 围观

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