原核表达IPTG诱导问题求助

反应条件较复杂，特别是对自己设计的引物来说，选择合适的退火温度，是需要慢慢摸索的，一般根据计算的退火温度降低5~10℃来进行首次扩增，如果出现了目的条带，且有杂带时，在逐步提高退火温度，以提高反应的特异性。此外，还有反应体系，电泳条件，时间等等因素。

你师兄的表达菌诱导后没有明显减少，你的减少了，首先应检查你们两个的实验条件是否相同，这个实验条件对诱导结果影响很大，建议先统一诱导条件

以下是可能的原因和解决方案：

感染性噬菌体的污染：BL21(DE3)pLysS菌株会表达T7裂解蛋白（T7 lysozyme），抑制感染性噬菌体（例如lambda噬菌体）的复制，保证载体在细胞中稳定存在。如果存在感染性噬菌体的污染，会导致载体丢失、细胞死亡等问题。建议进行细菌溶液的滴度扩增实验（例如使用TA法），排除感染性噬菌体的污染。

转化效率不稳定：不同的菌株、不同的质粒、不同的DNA片段都会影响转化效率。建议进行转化效率的测定，确认转化效率是否稳定，如果不稳定，可以优化化学电转化条件或电转化条件。

IPTG浓度和诱导时间的选择：IPTG的浓度和诱导时间会直接影响目的蛋白的表达量和菌体的生长状态。建议优化IPTG浓度和诱导时间，找到最佳条件进行表达。另外，如果发现诱导后细菌的生长速度很慢，可以考虑添加一些辅助生长因子，如氨基酸等。

质粒构建和目的蛋白的选择：质粒的大小、复杂度、目的蛋白的大小、复杂度都会影响表达效果。建议优化质粒构建和目的蛋白的选择，选用适合的载体和宿主菌株，或者进行分段表达或蛋白工程优化。

菌株处理和培养条件的优化：菌株的处理和培养条件也会影响表达效果。建议优化菌株的处理和培养条件，包括菌株的处理方式、菌液的密度、培养时间、培养温度、培养介质等。

总之，原核表达是一个复杂的过程，可能存在多种因素影响表达效果。建议系统地排查以上可能的原因，并进行逐步的优化和改进。

考虑可能是IPTG的浓度过高，形成了包涵体。

建议降低IPTG浓度和诱导温度，掌握好诱导时间试试。