IPTG 诱导蛋白表达实验

蛋白质实验

最新修订时间：2023-06-02

简介

用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）作为诱导剂诱导蛋白表达

原理

Lac阻遏物是一种具有4个相同亚基的四级结构蛋白，都有一个与诱导剂结合的位点。在没有乳糖存在时，lac操纵子（元）处于阻遏状态，Lac阻遏物能与操纵基因O结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，抑制转录起动。而当有诱导剂与阻遏蛋白结合后，其蛋白构象就发生变化，导致阻遏物从操纵基因O上解离下来，RNA聚合酶不再受阻碍，发生转录。在这个操纵子（元）体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经β-半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖——即生理上的诱导剂。而在实验中，通常选用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）作为诱导剂，IPTG是一种作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。

应用

蛋白质表达

来源：丁香实验

操作方法

IPTG 诱导蛋白表达实验

1.外源基因的诱导表达： 1) 用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA和目的基因； 2) 按连接步骤连接目的基因和载体，并转化到转化DH5α感受态细胞中； 3) 分别挑取单菌落接种于5mL LB ( 0.1g·L-1 氨苄青霉素)中，37℃培养过夜； 4) 以2%体积比转接于2ml LB( 0.1 g·L-1 氨苄青霉素)中，37℃继续培养2.5 hr，至细菌对数生长期，加0.1mmol/

诱导蛋白表达实验中，蛋白表达是包涵体怎么办？如何调整诱导过程？

包涵体成因是蛋白表达过快，局部浓度过高，具有相互作用的蛋白聚合沉淀。因此避免包涵体方法如下：1、降低诱导温度温度，延长诱导时间（如 16 ℃，16 h）；2、减少诱导剂浓度（0.01–0.1mM）；3、在蛋白前融合进 MBP、TRX 等促溶标签；4、更换弱启动子；5、适当增加盐浓度，在蛋白溶剂中加入 10% 左右的甘油；6、改变诱导剂的类型和浓度：适当调整诱导剂的类型和浓度，如改变 IPTG 浓度