要做乳酸菌膜蛋白差异分析，可是用了贝博的膜蛋白提取试剂盒感觉效果不好，问一下提膜蛋白的师兄师姐们，有没有好的提取膜蛋白的方法，谢

王府R9RE

2022-05-23

bamboopiggy

2022-05-23

有帮助

根据你的实验目的，你选一个要用的试剂盒吧，虽然我不能提公司的名字（要不就说我打广告），但是你应该可以搜到。对于这些比较细的实验，建议不要买国产的试剂盒，虽然便宜，但是做不出好结果。

天一湖医者

2022-05-23

有帮助

膜蛋白提取方法步骤，

1. 配制疏水性蛋白提取液(非裂解液)：1% Triton X-114，150 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，调pH值至8.0备用。

2. 菌液于4 ℃条件下15000 g离心15 min收集菌体;用1 ml 含有5 mM MgCl2 的PBS洗涤3次，蕞后于4 ℃条件下15000 g离心15 min收集菌体。

3. 菌体沉淀加入1 ml冷提取液，于4 ℃条件下放置2 h，17000 g离心10 min，去除沉淀取上清。

4. 将上述上清中的Triton X-114含量增加到2%，再加入20 mM的CaCl2抑制部分蛋白酶活性，37 ℃条件下放置10 min使其分层。室温下1000 g离心10 min使液相和去污相充分分层。

5. 将液相和去污相分开，分别用10倍体积的冷丙酮在冰上沉淀45 min。

6. 于4 ℃条件下17000 g离心30 min，用去离子水洗涤沉淀3次。

7. 将沉淀溶解在1% SDS溶液中，测定蛋白浓度，比较液相和去污相中蛋白提取效率，一般是去污相中疏水性膜蛋白较多，适于进一步蛋白实验。

8. SDS-PAGE进一步分析液相和去污相的蛋白图谱。