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细胞膜蛋白质的含量测定实验

实验分类:

蛋白质实验

最新修订时间:

简介

膜蛋白是存在于细胞质膜中的蛋白质分子,在细胞内分子运输、能量代谢、细胞和组织结构的维护以及细胞信号转导中发挥重要作用。目前,用于细胞膜蛋白提取的方法主要有三种:去垢剂和表面活性剂提取法、生物素化膜蛋白提取法和利用细胞膜糖蛋白的聚糖分离膜蛋白的方法。用于细胞膜中某一膜蛋白含量测定主要有三种:免疫沉淀法、免疫印迹法和在细胞原位采用流式细胞术。


原理

生物素化膜蛋白提取法(biotin-label membrane protein isolation)属于亲和纯化蛋白质的方法,将生物素与膜蛋白相偶联,利用生物素同鸡蛋清中的亲和素以及细菌中的链亲和素高亲和力结合的特点,分离纯化生物素偶联蛋白。生物素为水溶性分子,不能通过细胞膜的脂质双分子层,因此生物素分子只能与细胞膜蛋白相结合。蛋白质分子中赖氨酸残基上的8-氨基、半胱氨酸的巯基、蛋白质分子羧基端的天冬氨酸和谷氨酸是生物素及其衍生物的结合位点。

人们至今还不能对细胞膜中某一膜蛋白进行精确的定量,目前采用的方法大部分都是基于免疫学手段,即抗原-抗体结合的原理,对细胞特定膜蛋白进行相对定量,以比较同一细胞经过不同处理后目的蛋白含量的变化以及不同细胞间同一膜蛋白的含量差异。


来源:蛋白质的定性定量分析技术-《医学分子生物学实验技术》药立波第四版

操作方法

生物素化膜蛋白提取法结合免疫沉淀法测定细胞膜蛋白质含量

生物素化膜蛋白提取法能够获得高纯度的膜蛋白,缺点是在使用抗生物素蛋白作为生物素化蛋白的纯化结合分子时,常需要用蛋白变性的方法分离结合的蛋白,影响后续研究。原理生物素化膜蛋白提取法(biotin-label membrane protein isolation)属于亲和纯化蛋白质的方法,将生物素与膜蛋白相偶联,利用生物素同鸡蛋清中的亲和素以及细菌中的链亲和素高亲和力结合的特点,分离纯化生物素偶联蛋白

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